成人结膜干细胞位的免疫组织化学研究.pdfVIP

中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：筮盗日期： 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者馘．竺坠 指导教师签名： 逸益 一 一}，． ～中～～文一 遁 ～要～ 一 ～摘一 成人结膜干细胞定位的免疫组织化学研究 目 的 眼表存在两类干细胞，即分为角膜上皮干细胞和结膜上皮干细胞，它们 属于单能干细胞。目前对角膜上皮干细胞的基础研究和临床应用已取得了 丰硕成果，而对于结膜干细胞的研究尚处于起步阶段。 由于各种原因引起的结膜上皮严重破坏、结膜功能部分或全部破坏、杯 状细胞丧失等改变造成睑球粘连、粘蛋白缺乏、于眼等眼表疾病，极大影响 了患者的生活质量，而结膜重建是恢复眼表正常结构和生理的有效手段。 进一步研究结膜干细胞的确切定位及生物学特性、体外分离培养结膜干细 胞、用组织工程构建生物结膜是结膜干细胞的研究方向。 本实验利用免疫组织化学方法对细胞角蛋白K7、K14、K19及 标记物在成人结膜上皮细胞中的不同部位的表达情况和分布情况，推断成 人结膜上皮干细胞的定位特征。 方 法 1．材料及组织标本制备获取角膜移植供者的睑球结膜组织，连眼睑取 出完整睑球结膜，除去皮肤及皮下软组织(睑缘保留)，沿眼球矢状面剪取 眼球组织块(呈窄条状，包含全部睑结膜、球结膜、穹隆部结膜及睑结膜与 皮肤交接处)，40∥L多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，将组织蜡块制成3— 5¨m的切片。sP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒、CK7单克隆抗体、 体、PCNA单克隆抗体、AE5单克隆抗体等均购自福州迈新生物技术开发有 限公司。 2．免疫组织化学取相应切片按免疫组化SP法进行染色，采用阴性对 ．1． 照以PBS代替一抗，阳性对照采用由迈新公司提供的阳性对照片，光镜下 观察各标记物的表达和分布情况。 结 果 在近角膜缘球结膜上皮和睑缘部睑结膜的底层细胞的胞核阳性表达，K14 在各部位结膜上皮的基底部均阳性表达，MUC5Ac在各部位结膜上皮的杯 状细胞的胞浆阳性表达，K7在穹隆部球结膜的固有层中的腺体细胞有阳性 表达，MUC5Ac在全部结膜的杯状细胞的胞浆阳性表达。 结 论 本实验中PCNA与P63的阳性表达部位一致，在近角膜缘部球结膜上 皮和睑缘部睑结膜的底层细胞的胞核阳性表达以及MUC5AC，K14、K7、 K19、AE5在结膜不同部位的表达情况可以推测具有分化潜力的结膜干细 胞可能存在于近角膜缘部的球结膜和睑缘部睑结膜的上皮的底层细胞中。 关键词 干细胞；结膜上皮；定位；免疫组化 ·2· ，一一一…～一‘+、 (一曼兰!堕塑曼一，j