人羊膜间充质干胞分离培养鉴定及抑制异基因淋巴细胞增殖的实验研究.pdf

入攀骥瑟宠矮平细瞧分离培莠鉴怒及抑铡异基因淋巴细胞增戆的实验研究 中文攮要 人羊膜间充质于细胞分离培养鉴定及抑制异基因淋巴细 胞增殖的实验研究 中文摘要 研究曩的： l、体外分离培养、纯化并鉴定人羊膜闻充质干细胞(hAMSCs)。 2、研究kAMSCs对异基因混合淋巴纲胞反应(M媛)体系中淋巴缨胞增赡及相 关细胞因子的影响。 磅究方法： l、采用酶消化法放羊膜分离漱hAMSCs，进行传代培养、逐步纯纯，流式细胞 仪检测维胞表面标志，并通过条件培养基定向诱导，最后根据形态学、生物学特征、 细胞表面标志以及分化潜能鉴定hAMSCs纯度。 2、建立双淘MLR体系，加入丝裂霉素处理过的不嗣比例的hAMSCs，用礓掺 入法测定淋巴细胞增殖率并用ELISA法测定混合培养上清液中自细胞介素．2(102) 研究结果： l、觚羊膜中分离的细胞接种24小时焉使有少量的细胞然壁，经l周后逐渐形成 扁平单层细胞，璺漩涡状生长或成簇生长，随着细脆密度的增加，胞体变得细长，形 态类似成纤维细胞。培养的细胞可以稳定生长传代，丽且体磐培养10代以蜃，细胞 的增殖速度无明显减慢。 2、hAMSCs的原代缁脆在接种蜃2～8天后进入对数生长期，相差显微镜下观察 细胞突起向周围伸展，出现两个核细胞分裂相的hAMSCs多见，细胞密度增大，彼 此相连；11-14天进入平台期，hAMSCs铺满瓶底，细胞扩增趋缓，原代培养结束。 增速度基本稳定。传代詹以12小时，相差显微镜下即可观察到细胞贴壁；2q天后 进入到对数生长期，扩增速度明显快于原代培养；6~7天即可铺满培养板底。 人羊膜问充质干细胞分离培养鉴定及抑制异基因淋巴细胞增殖的实验研究 中文摘要 4、hAMSCs向神经细胞诱导24h后，细胞形态明显改变，胞体回缩，胞核部分 折光性增强，出现类似于树突及轴突样结构，染色可见兔抗人神经元特异性烯醇化酶 细胞形态由纺锤形转变为多角形，染色可见I型胶原阳性；3-4周后可见钙结节形成。 均明显强于1：500组(尸均0．05)。 于单纯MLR体系(PBMCl+PBMC2组)中的量(尸O．05)。 研究结论： 以及多向分化潜能。 2、hAMSCs可以抑制MLR体系中淋巴细胞的增殖，呈剂量依赖性；并可下调 MLR体系中IL．2和IFNq水平，对同种异体免疫反应具有负调节作用，为日后临床 联合应用MSCs和造血干细胞移植以预防和治疗移植物抗宿主病(GVHD)提供理论 基础。 关键词： 羊膜：间充质干细胞；体外扩增；免疫抑制；异基因；淋巴细胞；白细胞介素．2； 干扰素吖 作 者孙鸿丽 指导老师吴德沛 Ⅱ 入羊膜间充质千细胞分离培养鉴定及抑制辩基因淋巴细胞增殖的实验研究 英文摘要 一 amnion．derivedamniondenve stem CuitureO薹ofhumahUman mesencnymal their effectonthe cellsand inhibitory allogeneic blood peripherallymphocytes Abstract Objective stem to Toculturehumanamnion-derived vitro，and