消化道肿瘤错配复基因hmsh2和hmlh1的表达、突变及甲基化.pdf

消化道肿瘤错配修复基因hMSH2和hMLHl的 表达、突变及甲基化 博士研究生：马坚妹 指导教师：吕 申 教授 专业名称：病理学与病理生理学 摘 要 背景与目的：消化道肿瘤是我国常见的恶性肿瘤之一，又以胃癌 和大肠癌最为常见。作为多基因相关肿瘤，目前认为多种基因在不同 阶段参与了胃癌和大肠癌的发生过程，但其发病机制仍不明确。为维 持遗传的稳定，保持DNA复制的真实性，无论是细菌还是人类都有 着一套完整的DNA修复系统，修复受损或突变的DNA。其中修复 DNA复制中发生的碱基错配的系统称为错配修复系统，可避免复制错 误的产生与积累。参与组成这一系统的主要基因称为错配修复基因 (mismatch repair 伴有基因不稳定性的遗传性肿瘤一遗传性非息肉性大肠癌(hereditary colorectal rlon—polyposis 能缺陷。错配修复基因功能缺陷使复制错误得不到修正，突变累积， 进而导致基因组不稳，细胞失控，肿瘤发生。在此后的研究中人们逐 渐发现MMR基因不仅与HNPCC这样的遗传性肿瘤相关，与散发性 肿瘤也有密切的联系，特别是胃肠道肿瘤。MMR基因在散发性消化 道肿瘤中究竟扮演着什么样的角色，与肿瘤发生和发展有着怎样的关 系目前倍受关注。本研究通过对散发性胃癌和大肠癌组织中hMSH2 和hMLHl基因的蛋白表达、突变和甲基化状态的系统研究，探讨 MMR基因与消化道肿瘤发生及演进的关系。 材料与方法：胃癌标本76例取自2002．2003年大连医科大学附属 第一医院胃镜活检病例，经病理诊断证实为胃腺癌，每例包括癌组织 及其对应的癌旁粘膜组织，并通过快速尿素酶法检测胃粘摸组织中幽 门螺杆菌感染情况，采用免疫组化方法检测胃癌及其癌旁粘膜组织 大连医科大学附属第二医院外科手术病例，经病理诊断为大肠腺癌。 分析其与临床病理间的联系。采用CE．PCR-SSCP方法结合基因序列 合PCR技术分析其中37例hMLHl基因启动子区域的甲基化状况。 实验数据采用卡方检验、t检验和单因素方差分析统计学方法在SPSS 软件上进行分析。 结果： 一、hMSH2和hMLHl蛋白在胃癌中的表达及其与幽门螺杆菌感 染的关系 (P0，05)。 中高中分化腺癌和低分化腺癌的表达率显著高于黏液癌(P0．05)， 高中分化腺癌和低分化腺癌无显著性差异(PO．05)。 3．Hp感染组hMSH2蛋白的阳性表达率在胃癌组织中显著低于非 感染组(P(0．05)；在癌旁粘膜组织中的比较也呈现了相同的趋势， 癌组织和癌旁粘膜上皮中均低于非感染组，但均无显著差异 (P0．05)。 二、hMLHl和hMSH2蛋白表达与散发性大肠癌临床病理关系 以上患者中的表达水平显著低于70岁以下患者(P0．05)：在不伴有 转移病例中的表达显著低于伴有转移病例(P0．05)；在右半结肠中 的表达显著低于发生于除直肠外的其他部位的肿瘤(Po．05)；高、 中、低三种分化肿瘤中的表达水平依次降低，两两比较具有显著性差 异(P0．05)。 高值37．23，最低值1．34，中位值为9．06，其表达水平与患者性别、 年龄、肿瘤的部位、分化及转移间无明显相关关系(P0．05)。 三、散发性大肠癌hMSH2和hMLHl的突变情况 突变： 子未见突变，第12号外显子发现3例第384位密码子的错义突变 hMLHl蛋白表达水平居37例大肠癌蛋白表达水平的中位数以上，且 肿瘤部位均位于左半结肠以下。 四、hMLHl启动子甲基化情况的研究 l。在37例大肠癌组织发现6例启动子区域甲基化，占16．22％ (6／37) 2．甲基化病例蛋白表达mass值平均为3．11±1．68，显著低于无甲 基化发生病例(17．96±12．20)(PO．05)。 3．甲基化与患者年龄、性别、分化、转移及肿瘤部位间无明显相 关关系。 结论： 一、hMSH2蛋白表达异常与胃癌发生相关，其高表达可能是胃癌 Hp导致胃粘膜癌变的分子机制之一。 二、高龄所造成的hMLHl基因蛋白表达降低可能是导致散发性 大肠癌的原因之一；hMLHl基因表