缺氧对小鼠脑离线粒体通透性转换孔的影响.pdf

缺氧对小鼠脑离体线粒体通透性转换孔的影响 中文摘要 目的：探讨缺氧对小鼠离体脑线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore，MPTP)和氧化应激的影响，寻找缺氧所致脑损害的发病机制，为 其治疗提供理论依据。 (缺氧组、常氧组)，每组20只。颈椎脱臼处死后，冰上钝性分离取全脑，剪 碎后移入玻璃匀浆器匀浆，在4℃用梯度离心法提取线粒体。电镜检验线粒体， 二喹啉甲酸(Bicinchoninic O．5 体悬液。缺氧组线粒体悬液中通入100％N2和氧清除剂Na2S204mM(致P02 检测不到)，37。C水浴30min。常氧组线粒体悬液置于空气中，其余条件与缺氧 组相同。电镜观察线粒体超微结构，荧光分光光度计检测线粒体膜电位，酶标仪 测线粒体通透性转换孔开放情况，酶联免疫吸附分析(enzyme．1inked immunosorbent C，Cyt C)，比色法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛 结果： 1．缺氧对线粒体超微结构的影响：常氧组线粒体为圆形或椭圆形，线粒 体脊清晰，排列较整齐，双层膜结构较完整。缺氧组线粒体空泡变性较明显，大 多数嵴断裂溶解，双层膜结构不完整，外层膜破损现象易见。 2．缺氧对线粒体通透性转换孔的影响：与常氧组吸光比值(0．94+0．04)相比，缺 增加，差异有统计学意义(尸O．01)。 (P0．01)。 4．缺氧对线粒体释放的Cyt C增多，差异有统计学意义 缺氧组(11．6184+0．4931)ng／ml线粒体释放的Cyt (尸0．01)。 (P0．01)。 结论：1．缺氧导致脑离体线粒体体积膨胀，嵴断裂；说明缺氧可引起线粒体结构 41：3审 捩舌o C释放增加， 2．缺氧导致脑离体线粒体膜上的MPTP开放增强，膜电位下降，Cyt C 提示缺氧可能通过增加MPTP开放，降低膜电位，致线粒体内凋亡因子如Cyt 释放到胞浆增多，最终导致线粒体损害。 3．缺氧导致脑离体线粒体中SOD、GSH减少，MDA增多；提示缺氧可能通过减 弱抗氧化防御系统和增强线粒体脂质过氧化作用从而造成氧化应激损伤。 4．从离体线粒体水平提供了缺氧所致线粒体功能障碍的可能病理生理机制。 关键词：缺氧；线粒体；线粒体通透性转换孔；膜电位；细胞色素C；氧化应激； 离体实验；小鼠 Effectsof onthe HypoxiaMitochondria Permeability TransitionPorein isolatedMice Brain 【ABSTRACT】 objective： To theeffects of onthe investigate hypoxiamitochondria transition permeability pore，the o