胰高血糖素对新大鼠心肌细胞生长及脂代谢的影响.pdf

中文摘要 胰高血糖素对新生大鼠心肌细胞生长 及脂代谢的影响 摘 要 目的：糖尿病心肌病是糖尿病的严重并发症之一。它是 以心肌肥大增生、心肌纤维化、心肌细胞凋亡、心肌细胞功 能下降、细胞水平钙转运缺陷和脂肪酸代谢异常等为特征的 心肌病变。可导致心力衰竭、心律失常、心绞痛、心源性休 克和猝死。其发病机制还不清楚。胰高血糖素是胰岛Q细胞 分泌的一种多肽激素，其主要生理作用是促进糖原分解、抑 制糖原合成和增强糖异生，使血糖升高。近年来对胰高血糖 素也有了进一步的认识，强调了胰高血糖素在2型糖尿病发 病机制中的地位。本研究拟证实胰高血糖素对新生大鼠心肌 细胞是否有非升糖促生长作用，是否可引起心肌脂代谢异 常，并进一步探讨高胰高血糖素血症在糖尿病及其心肌病变 中的作用，为阐明糖尿病及其并发症发生发展的机制和研发 新的治疗策略寻找理论依据。 方法：采用胶原酶消化法和差速贴壁法分离新生大鼠心 肌细胞并做原代培养。常规培养心肌细胞72h后，更换为无血 modified 清的DMEM(Dulbecc0medium)培养液。每5 Eagle 孔细胞为一组，共分7组，换培养基的同时给药：第一组为正 常对照组，不给予药物；第二组为给予浓度10一omol／L胰高血 糖素的高胰高血糖素组；第三组为给予25．5mmol／L葡萄糖的 高糖组；第四组为给予10。7mol／L胰岛素的高胰岛素组；第五 中文摘要 高胰高血糖素组；第六组为给予25．5mmol／L葡萄糖和 10。7mol／L胰岛素的高糖高胰岛素组；第七组在第六组基础上 加入10。10mol／L胰高血糖素的高糖高胰岛素高胰高血糖素组。 给药后每天在倒置相差显微镜下进行细胞形态学的观察。给 药48h后进行各项指标的测定。 (1)倒置相差显微镜下观察处理前后心肌细胞形态学变化， 台盼蓝染色法计数处理后各组细胞数目。(2)末端脱氧核苷 酸转移酶(terminaldeoxynucleotidyl 物素酰化脱氧尿昔三磷酸(deoxyuridine mediateddUTPnickend 生物素原位缺口末端标记法(TdT 凋亡率。(3)紫外分光光度法检测细胞内游离脂肪酸(free fattyacid，FFA)和脂蛋白脂酶(1ipoproteinlipase，LPL)含量；生 化法检测细胞培养上清液心肌酶[乳酸脱氢酶(1actate kinase，CK)矛I肌酸激 dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(creatine ofcreatine isoenzyme kinase，CK．MB)】水平。 酶同工酶(MB 结果：(1)新生大鼠心肌细胞原代培养成功。 (2)分组给药后各实验组心肌细胞数目均较对照组增多，细 胞计数：正常对照组8．0×105／ml，高胰高血糖素组9．0× l 糖加高胰高血糖素组9．7x05／ml，高糖高胰岛素组9．0× 105／ml，高糖高胰岛素高胰高血糖素组10．0×105／ml。 (3)分组给药后检测心肌细胞凋亡隋况，镜下各组均可见棕 褐色核细胞，但多少不一，高糖组心肌细胞凋亡率32．80± P=-0．000)，差异有统计学意义；高胰高血糖素组与正常对 中文摘要 意义； 3个混合组与正常对照组比较，差异也无统计学意义 (PO．05)。 P=0．000)均较正常对照组明显升高，差异有统计学意义； 均较正常对照组明显升高，差异有统计学意义；高糖高胰高 均较正常对照组也明显升高，差异有统计学意义；高糖高胰 岛素高胰高血糖素组LPL较正常对照组明显升高(t=2．768， 组比较，差异均无统计学意义。 其余各实验组与对照组比较，差异均无统计学意义。 CK、CK—MB水平各实验组与对照组比较，差