脊髓水平nmd受体nr1亚单位磷酸化在孤啡肽痛觉调控中的作用研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 脊髓水平NMDA受体NRl亚单位磷酸化在孤啡肽痛 觉调控中的作用研究 研究背景与目的 神经病理性疼痛(neuropathicpain)是外周或中枢神经系统的结构受到损伤或 pain)、痛觉过敏 功能发生紊乱而引起的疼痛。可表现为自发性疼痛(spontaneous 是临床常规的镇痛治疗效果不佳。由此引发了人们对神经病理性疼痛产生机制及 药物镇痛机制的广泛研究。 cord centralsensitization)是病理性疼痛的产生、发 脊髓神经元敏感化(spinal 展和维持的重要的细胞学基础之一。越来越多的证据表明多肽在神经病理性疼痛 的调控中发挥重要作用。近来，一种较新的内源性阿片肽类受体．递质系统—孤啡 肽和其受体在痛信号的传递和调制过程中的作用已引起了人们的高度重视。在脊 髓中，孤啡肽富集于脊髓背角。脊髓背角尤其胶质区是伤害性信息传入和调制的 第一站，在此部位抑制痛觉信息是最经济而有效的。因此，在脊髓水平研究孤啡 肽与痛觉的感受和调控有着重要的理论和实践意义。 敏感化的产生有赖于神经元细胞膜上受体增多或离子通道功能的增强，而上 述改变又依赖于细胞内信号转导系统特别是激酶系统的激活，激活后的激酶可通 过磷酸化神经元膜受体或离子通道，改变神经元的兴奋性。蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)是神经系统中最重要的蛋白激酶之一。已有大量的证据表明PKC 的活化参与伤害性刺激引起的脊髓神经元敏感化的形成、发展和维持。NMDA受 位serine896位点，从而增强NMDA受体功能。NRl亚单位异常激活是脊髓敏感 化乃至痛觉过敏产生的重要机制。由于NMDA受体及PKC的活化都受孤啡肽信 号传导的调控。因此推测，脊髓PKC依赖性NMDA受体NRI亚单位磷酸化可能 参与孤啡肽脊髓水平的痛觉调节作用。本研究的目的在于探讨脊髓NMDA受体 上PKC磷酸化位点NRl亚单位serine896的磷酸化水平与孤啡肽痛觉调节作用的 关系。 论文一鞘内注射孤啡肽对大鼠脊髓NMDA受体 NRl亚单位磷酸化的影响 实验材料和方法 1、雄性SD大鼠16只，随机分为生理盐水(normalsaline，NS)对照组和孤啡肽 (orphaninFQ，OFQ)组(n．8)。以动物疼痛相关反应的时间为指标，在OFQ鞘内 注射后20分钟内每间隔5分钟对动物自发性疼痛表现作综合评分。 2、以甩尾潜伏期作为痛阈指标，用热水甩尾法观察OFQ鞘内注射后20分钟 甩尾潜伏期的变化。 成的影响。 4、利用western Q 脊髓NMDA受体PKC磷酸化位点NRlserine．896的磷酸化水平及磷酸化PKC Q)表达的变化。 (pPKC 实验结果 50 1、鞘内注射OFQPg后1015分钟诱发了特征性自发性疼痛反应，表现 为：过度舔爪、搔抓、嘶叫以及间隙性后肢的跛行。与NS组比较，OFQ组大鼠 自发性疼痛表现的总时间明显增多(40．9±3．4w．5．2±0．9)，差异有显著性 (氏O．01)。疼痛反应在OFQ注射后20分钟消失。 2、和基础值比，鞘内注射NS对大鼠的甩尾潜伏期无明显影响。而鞘内注射 2 OFQ的作用达顶峰。 3、鞘内单独注射MK．801(0．599)，chelerythrine(20I．tg)和NST(10gg)对动物 行为活动及甩尾潜伏期无明显影响，但明显减少OFQ鞘内注射引发的疼痛相关行 为反应的时间并取消OFQ缩短大鼠甩尾潜伏期的效应。 serine．896)与磷酸化PKC Q)水平开始上升，60分钟达高峰，维持120 Q(pPK