重组腺病毒-肝胞生长因子的克隆、表达及对大鼠肝纤维化的治疗作用.pdfVIP

重组艨瘸毒．黔细胞生长因子鲍竟隆、表达及对大鼓肝 纤维化的治疗髂援 研究艇李欣 导师 孙汶生 专韭 分子免疫学 中文摘要 f I翳纤维化是机体对多静慢幢肝脏损伤(如代谢素魏、长期戆 酒精摄入、血吸煦或病辩的持续感染筹)的共嗣反应，如缺乏有 效的治疗会不可逆地发展热肝硬化，磺最终引起肝功能失代镤、 食道静脉曲张、腹水和肝癌等致死经并发症。长期以来，对肝纤 维化缺乏鸯效的治疗方法薅仅仅傍鳍在阻止或延缓其进一步发展 的阶段。肝细胞鸯长舀子(hepatocytegrowth faetor,HGF)在肝脏的 发商和再生中起到不可缺少的律罔，还具有抗肝细胞凋亡、激活 多种细胞有丝分裂等活性，并能有效降解胶原纤维，舆有防治纤 维化的潜能。近年来随着分子生物学理论和技术的不断发展，在 基潮水平上治疗肝纤维化的研究取得重大进展。 一种璎想的基因治疗方案必须尽可能地保证遣烛成分在目 的部位保持较高的浓度并维持较长时闻，为此J本研究首次将 HGFeDNA连接到与肝细胞有离亲和性的腺瘸毒 (adenovirus，Ad)载体上，静脉注射到肝纤维化模型大鼠体内， 以探讨腺瘸毒介导的HGF基毅转导对大鼠肝纤维化的治疗作 用a． 钵研究具体炎成了以下王馋：l。以分子克隆手段获得携带 GT4050共转染293细胞，通过噬斑试验(plaqueassay)筛选单 竞隆重组滕病毒，并矮PCR方法证实燕经蕊瘸毒Ad-HGF构建 成功；3．在293细胞中扩增重姐腺病潦Ad—HGF和携带绿色荧 fluorescence 光蚕鑫(Green protein，GFP)基嚣魏对照蓬鲤躲瘸毒 Ad—GFP，破碎詹用氯化铯密度梯度超速离心法纯化重组腺病 毒，捡测瘸毒缝魔较好，以噬斑试验法测定病毒清发，漓度为8．6 forming ×10Ⅲpfu(plaqueunit)／ml；4．以二甲基皿硝胺(N． 大鼠尾静脉注射重组腺病毒到大鼠体内，连续测定其尿中羟脯氨 酸瓣塞量，并在给药毒O天后处冤动餐，检测英肝功能霾饔稽标 GPT、GOT、TP和Bil，并观察肝脏的病理形态学变化。结果表 明：与对照组糖跑，治疗鲤大氯纤维亿秘肝蜜麓运性交程度减轻， 有较多的新生肝细胞出现，镜下可观察到双核肝细胞，、并有少数 奏丝分袈稳；但与治疗繁轻对照锺糖跑，治疗羧阕治疼鳋大鼠藤 中羟脯氨酸24小时排出摄来显示出显著性差别(P0．05)，肝功 能拯标谷懿转氨酶(GPT)、蛊漆谷草转氨簿(GOT)、盘清恶蛋 结纂分撬袭臻，绘予rAd-HGF可以使已影盛瓣纤维亿翡丈蔑翳 脏瘸变显著改善，并显示出恢复和再生的趋势。本实验~丰刀步证明 了HGF对嚣于纤维亿戆治疗作震，具煮炎好懿藏雳蓑爨，———一～ 关键词：肝纤维化；重组腺病毒；肝细胞生长蹰予；基因治疗 英文摘要 andGcne Recombinant truct sion of Cons ion,Expres Therapy onI【at Adenovirus胡GFFibrosiS Xin Graduate：Li Tutor： Sun Wensheng -、 Molecular Major Immunology Abstract Liver