p-糖蛋白在神细胞内的降解机制及其临床意义.pdfVIP

塞山匡堂瞳亟±堂焦诠塞 P．糖蛋白在神经细胞内的降解机制及其临床意义 研究生：王慧 专业：儿科学 导师：王广新教授 中文摘要 结构和药效不同的化合物排出细胞，是产生多药耐药的主要原因之一。目前P一糖蛋 白在多要耐药方面的研究主要集中在肿瘤及难治性癫痫的发生，其中肿瘤的发生是原 癌基因的激活、抑癌基因的抑制、凋亡基因及修复基因的改变等多因素综合作用的结 果，而P一糖蛋白的升高是癫痫发展为难治性癫痫的重要生物学基础，因此，P一糖蛋白 在难治性癫痫中的作用机制研究尤为重要。目前关于P一糖蛋白基因调控及相应的信 号传导通路成为P一糖蛋白的研究热点，但是P一糖蛋白处于不断的合成与降解的动态 平衡，因此，从P一糖蛋白降解的角度揭示P一糖蛋白在多药耐药中的作用机制是一个 新思路。 目的 研究神经细胞内P一糖蛋白的降解途径并探讨P一糖蛋白在神经细胞内降解对难治 性癫痫治疗的临床意义。 方法 1．腺病毒作为载体，将ABCBl基因转染到U251细胞，建立高表达P一糖蛋白的 细胞模型。 2．在已建立的高表达P一糖蛋白的细胞模型上，不同浓度的特异性蛋白酶体抑制剂 blot检测 MGl32、溶酶体抑制剂ChlQ处理细胞24h，同时设定时间依赖组。Western P一糖蛋白水平的变化情况，明确神经细胞内P．糖蛋白的降解途径。 结果 1．蛋白酶体抑制剂MGl32处理组，P．糖蛋白在蛋白酶体抑制剂处理后表达明显 升高，且P一糖蛋白表达随着MGl32浓度的升高而升高。P一糖蛋白表达与蛋白酶体抑 制剂处理时间无明显相关性，但是蛋白酶体抑制剂处理可以明显增加P-糖蛋白的表 达。 2．溶酶体抑制剂ChlQ处理组，P一糖蛋白的表达与对照组相比无明显异常，且不 1 万方数据 塞出医堂瞳亟±堂焦途塞 随溶酶体抑制剂浓度及处理时间变化而变化。 结论 1．神经细胞内P．糖蛋白的降解与溶酶体途径无关。 2．神经细胞内P一糖蛋白的降解通过泛素一蛋白酶体途径。 3．抑制泛素．蛋白酶体功能可以增加神经细胞内泛素化P．糖蛋白的含量，引起神 经细胞内P一糖蛋白积聚。 关键词：P．糖蛋白，泛素一蛋白酶体，降解，难治性癫痫 万方数据 T硼DEGRADATIoNMECHANISMof IN THENERVECELLSANDITSCLⅡ呵ICALSIGNⅡrICANCE Master Hui Candidate：Wang Degree Major：Pediatrics Supervisor：ProfessorWangGuangxin ABSTRACT themost and studiedmembersofABC widely P-glycoprotein(P—gP)isimportant detoxifiescells (ATPBindingCassette)superfamily．P—glycoproteinbyexporting