半夏泻心汤对slt;,180gt;小鼠和人胃癌bgc-823细胞的作用及其机制研究.pdfVIP

中文摘要 半夏泻心汤对S180小鼠和人胃 癌BGC．823细胞的作用及其机制研究 摘 要 目的：通过体内实验探讨半夏泻心汤对荷瘤昆明小鼠 S，卸的抑制作用及其作用机制；并通过体外实验探讨半夏泻 心汤大鼠含药血清对人胃癌BGC．823细胞的增殖抑制作用 及其机制，进而探讨其用于胃癌治疗的可行性。 方法：1动物实验：选择雄性清洁级昆明小鼠50只，将 7个／rrfl，取细 经小鼠腹腔传代的S，80细胞，调整浓度至lxl0 胞悬液0．2ml，接种于小鼠右上肢腋部皮下。于接种次日将 其随机分成5组：空白对照组、半夏泻心汤低剂量组(19／m1)、 环磷酰胺组，每组10只。空白对照组灌服生理盐水，各中 药组分别灌服三个不同剂量的半夏泻心汤，0．15ml／109．d每 日灌药1次，共14天，环磷酰胺组给予环磷酰胺 有小鼠称重后处死，立即剥瘤、取脾、称重，计算肿瘤抑制 率及脾指数。同时取瘤组织，用免疫组化法分析VEGF、Bcl一2 蛋白表达情况。应用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡并定量 分析VEGF、Bcl．2蛋白表达的变化。2体外实验：按“通法” 半夏泻心汤大鼠含药血清。然后选择人胃癌细胞系BGC．823 细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTlr)LL色法检测低、中、高三 组半夏泻心汤大鼠含药血清、不同时间组(24h、48h、96h) 中文摘要 对BGC．823细胞增殖的影响。应用免疫细胞化学 式细胞术测定不同剂量组半夏泻心汤大鼠含药血清对人胃 癌BGC．823细胞作用48h后的细胞周期分布及细胞凋亡的影 响。应用流式细胞仪问接免疫荧光技术分析不同剂量组半夏 Bcl一2蛋白表达的变化。 结果：1动物实验(1)于给药结束后次日处死5组s，80 荷瘤小鼠，称量各组的瘤重及脾重，分别计算各组的抑瘤率 及脾指数。低、中、高中药组和环磷酰组的抑瘤率依次22．2％、 45．9％、57．8％、73．0％，三个中药组的抑瘤率随半夏泻心汤 剂量的增大逐渐增加。空白对照组、低、中、高中药组和环 高剂量中药组的脾指数与空白对照组比较明显升高，差异具 白对照组细胞中VEGF、Bcl．2染色均为阳性，细胞的胞浆或 胞膜中可见棕黄色着色。各中药组中VEGF及Bcl．2在细胞 中的染色强度明显减弱，而环磷酰胺组细胞中的VEGF、 Bcl．2染色仍为阳性。(3)流式细胞术检测结果显示：对细胞 周期的分析结果显示：低、中、高半夏泻心汤组与对照组相 比，GdG，期细胞逐渐增多，S期和G加I期细胞则逐渐减少， 提示半夏泻心汤可阻滞细胞周期于Go／G。期，且该作用具有 剂量依赖性。瘤组织经流式细胞术检测凋亡率结果显示：空 白对照组、中药低、中、高三组及环磷酰胺组的凋亡百分率 中文摘要 量中药组和环磷酰胺组均出现典型的亚二倍体凋亡峰，且各 中药组随半夏泻心汤剂量的增大凋亡率逐渐升高。中药各 组、环磷酰胺组的凋亡率分别与空白对照组比较，差异具有 统计学意义(P0．05)。流式细胞仪间接分析细胞VEGF、 Bcl．2的蛋白表达显示：空白对照组、中药低、中、高三组 及环磷酰胺组细胞中VEGF的荧光指数FI值依次为2．783、 高三组及环磷酰胺组细胞中Bcl一2的荧光指数FI值依次为 组减小，对于每种蛋白，分别比较各中药组、环磷酰胺组与 空白对照组的FI值，差异具有统计学意义俨O．05)。2体外 实验(1)MTr比色法结果显示：低、中、高剂量半夏泻心汤 大鼠含药血清对BGC一823细胞均具有增殖抑制作用。不同剂 量组的半夏泻心汤含药血清处理细胞24～96h后，与对照组 比较，各中药组OD比值均有不同程度的下降，差异具有统 计学意义fP0．05)。且随半夏泻心汤含药血清剂量的增大、 作用时间的延长，OD比值逐渐下降，即半夏泻心汤含药血 清对BGC．823细胞的增殖抑制作用有明显的剂量依赖性和 时间依赖性，且抑制率以高剂量半夏泻心汤含药血清作用 72h为最高，可达52．9％。f2)免疫细胞化学检测结果显示：未 染色均为阳性，细胞的胞浆或胞膜中可见棕黄色着色。而经 三个剂量组的半夏泻心汤含药血清处理48h后的细胞中， 显示：低、中、高剂量组半夏泻