树突状细胞食管融合疫苗诱导的细胞毒性t细胞特异性抗人食管癌免疫反应研究.pdfVIP

中文摘要一第■部分 第二部分树突状细胞／食管癌融合疫苗诱导的抗原特异性CTLs对人食管 癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及生物学影响 背景与目的： 食管癌的发病率和死亡率在我国均居恶性肿瘤的第四位，是严重危害我国人民健 康和生命的疾病，目前的综合治疗手段疗效有限，需探索能够有效治疗食管癌的其他 治疗手段。肿瘤的生物免疫治疗目前被认为是继手术、放疗、化疗之后对肿瘤具有确 切效果的又一治疗方法，而其中树突状细胞／肿瘤细胞融合疫苗在抗肿瘤免疫中起着极 其重要的作用。本研究旨在证实DC／肿瘤细胞融合疫苗诱导的抗原特异性CTLs对食管 癌细胞的体内特异性杀伤作用，探讨抗原特异性CTLs对移植瘤的生长抑制作用及对移 植瘤细胞生物学特性的影响。为Dc／食管癌细胞融合疫苗的临床应用提供依据。 材料和方法： ml接种于 盐水配成2×107／ml瘤细胞悬液，无菌条件F用注射器抽取瘤细胞悬液0．5 裸小鼠右侧腋部皮下使之荷瘤。 养T淋巴细胞。 融合疫苗。 化激活的T淋巴细胞。 瘤内注射进行免疫治疗，B组(n=11)以未激活的T淋巴细胞瘤内注射进行免疫治疗，C 次。 (6)每周测量各组裸鼠移植瘤的最大径及最小径，计算各组肿瘤平均体积，绘制 各组肿瘤组织生长曲线，4周后用颈椎脱位法处死动物，剥离原位肿瘤，测量各组肿瘤 的体积及湿重，比较各组肿瘤的平均体积和平均湿重。 Ill 文摘业．第部分 (7)取移植瘤组织经lo％甲醛固定脱水、石蜡包埋切片、HE染色作常规病理检查， 并采用免疫组化S-P法，检测全部裸鼠移植瘤PcⅥ的表达情况，用PCNA标记指数(PCNA Label PCNA—LI。 (8)取新鲜肿瘤组织剪碎后制成单细胞悬液，以流式细胞仪检测细胞凋亡率及细 胞周期。以S期细胞百分比(S-phasefraction，SPF)表示细胞的增殖活性，比较各组 肿瘤细胞的平均SPF值以及平均细胞凋亡率。 (9)分别取移植前体外培养的处于对数期生长的食管癌细胞株EC一109细胞及C 组移植瘤组织单细胞悬液，流式细胞仪检测两种细胞表面MUCl抗原的表达。 结果： (1)共有33只裸小鼠荷瘤成功，总的成瘤率为82．5％，第一次免疫治疗后A组裸 小鼠意外死亡1只。 (2)从肿瘤的生长曲线可见，治疗开始后，三组肿瘤的平均体积差异逐渐明显， 治疗结束时A组肿瘤的平均体积明显小于B、c两组(／KO．05)，差异有统计学意义。 学意义。 (4)移植瘤组织病理学检查见A组肿瘤中可见大量凋亡的肿瘤细胞，肿瘤组织中 淋巴细胞浸润明显，而c组肿瘤则瘤细胞丰富、生长旺盛，呈浸润性生长，肿瘤组织 中淋巴细胞浸润少。 (5)免疫组织化学染色可见PCNA在各组移植瘤细胞中均有表达，A、B、C三组肿 统计学分析表明，A组PCNA标记指数明显低于B、C两组(尺0．05)，差异有统计学意 义。 两组(P(O．05)，差异有统计学意义。A、B、C三组肿瘤细胞的平均凋亡率为分别为(38．03 Ⅳ 中文摘要．第一．部分 于B、C两组(尺O．05)，差异有统计学意义。 原MUCI的平均表达率为97．5％，两者基本一致。 结论： (1)本研究成功建立了人食管癌EC-109细胞裸鼠皮F移植瘤动物模型。 射具有抑制人食管癌皮F移植瘤生长的作用． (3)融合疫苗可以抑制食管癌细胞的增殖、局部诱导食管癌细胞周期阻滞及细胞 凋亡． (4)该治疗方法抑瘤作用明显，提示融合疫苗体外诱导的CTLs瘤内注射有可能成 为一种有效的抗食管癌治疗方法。 关键词：食管肿瘤；树突状细胞；融合疫苗；皮F移植瘤；裸鼠 V Abstract-Part Inductionof T human