针对vegf-的sirna对角膜新生血管的干预研究.pdfVIP

同等学力申请硕士学位 学校代码：10266 学号：KCB2005185 针对VEGF-A 的siRNA 对角膜新生血管的干预研究 摘 要 目的 探讨人工合成的针对VEGF-A的siRNA对角膜新生血管的抑 制的效果和机制。 方法 C57 BL/6 小鼠随机分为4 组，麻醉后右眼碱烧伤诱导角膜 新生血管。A 组使用VEGF-A siRNA 结膜下注射干预，B 组使用Stable negative control siRNA 结膜下注射干预，C 组使用生理盐水结膜下 注射干预。所有右眼接受注射，左眼做正常对照。D 组不使用任何药 物做对照。各组观察并比较角膜新生血管的面积、数量、通透性和角 膜组织结构的变化。其中角膜新生血管的标记和记数使用 CD31 抗体 DAB 免疫组化染色的方法，观察角膜新生血管的通透性使用荧光血管 造影的方法。并使用 Elisa 法测定并比较各组角膜蛋白抽提液 VEGF 的含量。 结果 在碱烧伤第 10天，各组角膜新生血管的生长达到高峰；A 组角膜新生血管的面积明显少于其他各组（P=0.004），数量明显少于 其他各组（P=0.000）；使用荧光造影观察A 组角膜新生血管的渗漏也 明显少于其他各组。在碱烧伤第3, 7 天A 组角膜组织VEGF 的含量明 显少于其他各组（P=0.009）。针对VEGF-A 的siRNA 对角膜VEGF 蛋白 的分泌和角膜新生血管的生长有明显抑制作用，对角膜新生血管的通 透性、角膜组织结构也有较大改善。 结论 本研究证实人工合成的针对VEGF-A 的 siRNA 结膜下给药 是有效的，对角膜新生血管有显著抑制作用。为临床治疗角膜新生血 管提供了新的思路和方法。 关键词：小干扰RNA（siRNA），角膜新生血管(CRNV)，血管内皮 生长因子（VEGF），治疗 同等学力申请硕士学位 学校代码：10266 学号：KCB2005185 INHIBITION OF EXPERIMENTAL CORNEAL NEOVASCULARIZATION BY A SIRNA TARGETING VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR-A ABSTRACT Objective To determine whether synthetic small interference RNA ( siRNA) targeting VEGF-A could inhibit mouse corneal neovascularization(CRNV) induced by alkali burn. Methods Corneal neovascularization was induced on the right cornea of C57BL/6 mice by alkali burn. Mice were randomly divided into four groups (21 animals in each group): Synthetic modified siRNA targeting VEGF-A group, stable negative control siRNA group, normal saline group and blank control group. On day3 and 7, the concentration of VEGF in corneal were determined by ELISA kit. On day 10, neovascularized corneal area was quantified, CD31 was used as endothelial cell marker for i