第十八章 色谱分析法概论.ppt

第十八章 色谱分析法概论 第十八章 色谱分析法概论 第一节 概述 色谱分析法是一种物理或物理化学分离分析方法。 始于20世纪初； 30与40年代相继出现了薄层色谱与纸色谱； 50年代气相色谱兴起、色谱理论、毛细管色谱； 60年代气相色谱-质谱联用； 70年代高效液相色谱； 80年代末超临界流体色谱、高效毛细管电泳色谱。 一、色谱过程 固定相 色谱法的基本原理 色谱法的分类： 1、按流动相与固定相的分子聚集状态分类 气相色谱法(gas chromatography,GC) 气-固色谱法（GSC） 气-液色谱法（GLC） 液相色谱法(liquid chromatography,LC) 液-固色谱法（LSC） 液-液色谱法（LLC） 超临界流体色谱法(supercritical fluid chromatography,SFC) 2、按操作形式分类 柱色谱法(填充柱、毛细管柱、微填充柱) 平板色谱法(纸色谱、薄层色谱TLC、薄模色谱) 毛细管电泳法（CE） 3、按色谱过程的分离机制分类 分配色谱法 吸附色谱法 空间排阻色谱法(SEC) 离子交换色谱法(IEC) 亲合色谱法 二、基本类型色谱法的分离机制 1、分配色谱法 二、基本类型色谱法的分离机制 2、吸附色谱法 二、基本类型色谱法的分离机制 3、离子交换色谱法 二、基本类型色谱法的分离机制 4、空间排阻色谱法 三、分配系数与保留行为的关系 1、分配系数 3、保留时间与分配系数的关系 设在单位时间内一个分子在流动相中出现的几率（即在流动相中停留的时间分数）为R/。 若R/=1/3，则表示溶质在色谱柱中的移动速度将是流动相分子速度的1/3。 色谱过程方程： tR=t0(1+KVS/Vm) 色谱过程方程的意义 在色谱柱（或薄层板）一定时，Vs与Vm一定；若流速、温度一定，则t0一定。这样，tR取决与分配系数K，K大的组分tR长。K与组分、流动相和固定相的性质及温度有关。因此，在实验条件一定时，tR取决于组分的性质，因而，tR可用于定性。 分配系数大的组分保留时间长，晚流出色谱柱。 K在不同类型的色谱法中有不同的含义。 K VS 分配色谱 分配系数K 固定液体积 吸附色谱 吸附系数Ka 吸附剂表面积 离子交换色谱 选择系数KS 总交换容量 凝胶色谱 渗透系数KP 孔容 分配系数不等是分离的前提 当KAKB，则，B先于A流出色谱柱。 仪器分析 xie * 流动相 被分离组分 色谱过程是物质分子在相对运动的两相间分配“平衡”的过程。混合物中，若两个组分被固定相吸附强弱不等，则被流动相携带移动的速度不等，产生差速迁移而被分离。 色谱法 气相色谱法（GC） 填充柱色谱法 毛细管柱色谱法 GLC GSC 液相色谱法(LC) 柱色谱法 平板色谱 高效毛细管电泳法(HPCE) 经典液相柱色谱法 高效液相色谱法(HPLC) 薄层色谱法（TLC） 纸色谱法 超临界流体色谱法（SFC） Xm XS m S 利用被分离组分在固定相或流动相中的溶解度差别。 在LLC中K主要与流动相的性质有关；在GLC中K与固定相极性和柱温有关。 Xm Xa m S 利用被分离组分对固体表面活性吸附中心吸附能力的差别。 吸附系数与吸附剂的活性、组分的性质和流动相的性质有关。 Ym m S SO3－R H+ SO3－R H+ X+ 利用被分离组分离子交换能力的差别。 X+ KS与离子的电荷和水合离子半径、流动相性质和pH、离子交换树脂的性质及温度有关。 利用被分离组分分子的线团尺寸。 两个假设： 孔内外同等大小的溶质分子处于扩散平衡状态。 渗透系数的大小只由溶质分子的线团尺寸及凝胶孔隙的大小所决定。 当分子大到不能进入凝胶的所有孔隙时： [XS]=0，则KP=0 当分子小到能进入所有孔隙时： [XS]=[Xm]，KP=1 当分子尺寸在上述两种分子之间时： 0Kp1 在高分子溶液中，相同成分的分子的线团尺寸与其分子量成比例。因此，在一定分子线团尺寸范围内，KP与分子量相关。 2、保留时间 进样点 t0死时间 tR保留时间 tR保留时间 因为t0为流动相分子流经整个色谱柱的时间，所以溶质分子流经同样路程所需时间tR将1/R/倍于t0，即: tR=t0/R/ 若R/=1/3，则表示溶质在色谱柱中的移动速度将是流动相分子速度的1/3。 因为t0为流动相分子流经整个色谱柱的时间，所