rapamycn与aslt;,2gt;olt;,3gt;联合诱导nb4细胞凋亡及其信号转导机制的研究.pdfVIP

i n与As。0。联合诱导NB4细胞凋亡及其 Rapamyc 信号转导机制的研究 硕士研究生： 刘 晶 指导教师： 岳辉 教授 指导小组： 马东初 教授 于卉影 主治医师 专业名称： 内辩学 籀 妥 背景等目的：As20j在藩床上瘸子涤疗APL，尤其是对维甲酸对药 及难治的APL已经取得了显著的疗效。As203抗肿瘤作用机制包括以 下几个方面：(1)降解PML—RARa蛋自；(2)调节凋亡相关基因的表达； (3)通过线粒体依赖性通路诱导细胞凋亡：(4)诱导肿瘤细臌分化；(5) 通过原浆毒及过氧化自由基发挥抗肿瘤作用；(6)直接损伤DNA(7) 抑制盘管生成；(8)下调端粒酶的活性。As20。对APL主要作耀毒足划是 诱导APL细胞分化和凋亡，以及影响细胞周期的调控和相关的信号转 导：l羲鼹。Rapamycin是大繇内酯类撬生索，具有抗真越、免疫搀割及撬 肿瘤的作用，它通过与细胞内特异性亲和蛋白FKBP．12结合影成 磷酸纯的调节作用减弱或消失，阻断氨基酸等营养闲子和多种生长因 子转导的信号下传作用，从而抑制了翻译的开始；Rapamycin还能通过 降低CDK—cyclin复合物激酶的活性，使细胞周期阻滞在G．期，从而 发撵抗肿癣的作用。近年来，肿瘤被认为是一种“纲腿周期性疾痰”， 所以细胞周期可以作为抗癌药物的靶点，单…靶点药物单独应用诱导 量申癣髑亡懿作照较弱，瑟联合应雳多瓣点药物蛉效暴可戆骥显铙予单 一药物治疗且毒性反应可熊减轻。根据l乍用于细胞周期的不阉靶点或 株NB4细胞，以期它们对NB4细胞的凋亡有协同作用。本实验的目的 对NB4细胞凋亡的协同作用及英相关信号转导机制，为临床更有效治 疗APL提供实验依据。 法测细胞增殖能力；姬姆萨染色观察凋亡缨胞的形恣学变化；采耀泼 式细胞技术分析纲胞周期和纲胞蹋亡情况；采用琼脂耱凝胶电泳梭测 细胞凋亡的DNALadder(DNA梯形条带)；Westernblot法检测凋亡樱 MAPK和p90RSK、 关畿自caspase。3、ERKI／2信号通路相关虽自p44／42 白p34cdc2稻cyclinBl躺表达及修饰的变纯。 缝暴：台黔蓝摄染法涯实As203处理NB4缨魏t6h露，缨戆总数 郝瀵细胞数均不周程度减少，绷施增薅靛力减低。姬姆萨染色震，在 毙学曼徽镱下爵鼹察到NB4缨藏鲍形态学变饱：细熊体积变枣，细爨 膜完整，绷胞核固缩呈不规则形或圆形，染色质数密成团块状和热型 的溺亡小傣。流式纲胞术结采显示As203处蘧NB4细胞后，G2／M期细 胞增加，而且隧赣As203浓度的丹赢，{乍用时间的延长，G2／M期细胞 As203处理NB4 增多越显著(Po．01)。DNA含爨分析袭嘴，O．59mol／L 缅愍t6h，G，期前开始如现驻=倍俸蠲亡峰《AP)。琼脂糖凝胶电泳显 示，0。5~4，09mol／L 亡缨憨典型的梯狄匿谱。 (尹《O。05)，缀魏鞴亡率增龆《PO+05)显隧羲传雳蹲闽鲮延长，G，璇缡 胞增多和细胞凋亡率增加；DNA片段凝胶电泳可看到基因组DNA呈 现明显髓确亡梯形条带，雨虽DNA满亡所断裂的祭带更多，燹清额。 Western blot绥果显示： (1)与对照级比较，As203缒和 ·’ 1的表达均 p44／42 在Thr389位点的磷酸化水平降低，而在As203组无改变。 NB4细胞凋亡的作用可能与ERKl／2信号途径的介导或活化有关。5． mTOR途径。 关键词： As203 细胞凋亡 细胞周期 信号转导 Rapamycin