丙型肝炎病毒基亚型、机体免疫功能与抗病毒疗效研究.pdfVIP

中文 摘 要 丙型肝炎病毒基因亚型、机体免疫功能 与抗病毒疗效研究 摘 要 目的:探讨HCV基因亚型、机体免疫功能对慢性丙型 肝炎患者抗病毒疗效的影响，以及HCV基因型与机体免疫 功能的关系。 方法:治疗前，检测所有入选慢性丙型肝炎病例的血清 HCVRNA含量、血清ALT水平。采用Simmonds基因分型 法于治疗前检测病例组的HCVRNA基因亚型。将丙型肝炎 病毒基因组特异片段固定在尼龙膜每个预定的区域内制成 芯片。从待检的血清中分离出HCVRNA，经PCR扩增和 DIG-11-dUTP标记后，通过碱基互补配对的原理与芯片进行 杂交，显色后通过计算机判读杂交信号或与模式图比较判定 结果，进而对丙型肝炎患名一进行基因型检测。 PI时于治疗前检测所有入选病例血清IL-4和IFN-y水平， 以及检测健康对照组血清IL-4和IFN-yo取空腹静脉血2m(,室 温静置6小时后离心，取血清一20℃储存，采用双抗体夹心酶联 分析法同批测定全部血清标木。IFN-检测方法:从己平衡至 室温的密封袋中取出所需反应板，分别将标本及不同浓度标 准品((100gL/孔)加入相应反应板孔中，轻轻混匀30秒后封住 板孔，37C20分钟之后洗板5次，每孔加入5ulAntiIFN-r Biotin和50ulIFN-rHRP,轻轻混匀30秒，封住板孔，370C15 分钟后再洗板5次。侮孔加入50u11G物A和50u11iXk物B,轻轻 混匀10秒，室温避光温育312分钟，侮孔加入l00u(终止液， l 中 文 摘 要 轻轻混匀30秒，30分钟内在酶标仪_1几450nm处读OD值，绘制 标准曲线，测出血清中IFN-r的浓度。1L-4检测方法:从已平 衡至室温的密封袋中取出所需反应板，分别将标本及不同浓 度标准品(20匹/孔)加入相应反应板孔中，之后每孔加入100ul AntiIL-4Biotin，轻轻混匀30秒后封住板孔，3室温(18-25C) 30分钟，洗板5次。每孔加入150ulAntiIL-4POD，轻轻混匀 30秒，封住板孔，室温 (18-25C)30分钟，再洗板5次。 每孔加入 100u1显色液，轻轻混匀10秒，室温温育20分钟 后每孔加入50u1终止液，轻轻混匀30秒，30分钟内在酶标 仪上450nm处读OD值，绘制标准曲线，测出血清中IL-4 的浓度口血清IFN-y和IL-4水平分别作为反映Thl和Th2 淋巴细胞亚群功能的指标。 将入选病例分为A和B两组进行抗病毒治疗。A组采用 干扰素300ug每周肌注3次(最初为每口1次，连用4天)， 同时口服利巴韦林每日900mg;共24周:B组采用干扰素 300ug甸周肌注3次 (最初为每日1次，连用4天)，同时口 服利巴韦林每日900mg;同时口服苦参碱胶囊(0.2Tid)，共 24周。符合所有入选标准的病例在第12,24,36,48周时 应行血(包括白细胞分类计数)尿便常规;血生化检查(ALT, Alb.,Glu、Alb/Glu,)检查。治疗24周结束时再次检测患 者的血清ALT水平和HCVRNA水平，以HCVRNA为主要 评价指标观察抗病毒疗效。 结果:有63例患者确定了HCV基因亚型，作为实验组。 其中lb型49例 (77.78%),2a型14例 (22.22%)。实验组 血清IFN一水平显著低于正常对照组，而IL-4水平显著高于 正常对照组，具有统计学意义 (p0.05,P0.05)。不同基因 一 .一 ，‘.一 ..，，- 一 ~ 一 一 一 .，‘.一 一 ‘， ‘，，叫卜 ‘、 2 中文 摘 要 型间，lb型的病毒载量显著高于2a型(p0.05)，血清IFN-y 水平则显著低于2a型(p0.05),两组间血清ALT水平和血 清IL-4水平无VI著性差别(p0.05.p0.05)。血清IFN-y.IL-4 水平与患者的年龄、性别、获得途径、病毒载量以及血清 ALT水平均无显著相关 (p0.0