人喉癌细胞系hp-2中的肿瘤干细胞与放疗抵抗关系的初步研究.pdf

目 录 中文摘要 ………………………………………………．． 英文摘要………………………………………………．． 研究论文 人喉癌细胞系Hep-2中的肿瘤干细胞与放 研究 —1上‘—jL 刚舌 ………………………………………………。 材料与方法………………………………………．． 结果………………………………………………．． 附图 ………………………………………………．． 附表………………………………………………．． 讨论………………………………………………．． 结{仑………………………………………………．． 参考文献………………………………………………………………28 综述 肿瘤干细胞学说与肿瘤干细胞放化疗抵抗现象的研究进 展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31 致谢………………………………………………………………………．42 个人简历 ……………………………………………………………………43 中文摘要 人喉癌细胞系Hep一2中的肿瘤干细胞与放疗抵抗关系的初步研 究 摘 要 目的。：目前研究已证实CDl33是人喉癌细胞系Hep．2中肿瘤干细胞 表面标志物，表达CDl33+的细胞具有肿瘤干细胞的特性。本试验拟通过 研究放射治疗后的人喉癌细胞系Hep．2，检测其CDl33+细胞比例、细胞 增殖抑制率及细胞周期分布情况，发现检测指标的变化特点及各指标之间 的关系。探讨放射治疗对喉癌肿瘤干细胞的影响，验证肿瘤干细胞是否存 在放疗抵抗的特性，明确肿瘤干细胞在肿瘤细胞放疗抵抗现象中的作用。 为进一步研究头颈部肿瘤干细胞放疗抵抗特性及其更深层次机理做初步 探索研究，为今后发现以肿瘤干细胞为靶点治疗头颈部肿瘤的新途径寻找 实验方法。 方法：复苏人喉癌细胞系Hep．2细胞，在37℃、5％CO：、20％02、 饱和湿度条件下的湿润恒温培养箱中培养，取对数生长期细胞，给予不同 剂量的放射治疗处理后，分别用于以下实验： 1．倒置荧光显微镜下观察Hep．2细胞接受不同剂量60Co放疗作用后 细胞形态学的改变及特点。 2．应用MTT法检测人喉癌细胞系Hep一2在接受放射治疗处理后的细 胞增殖抑制率，发现其放射治疗处理后的增殖生长规律。 3．应用流式细胞技术检测人喉癌细胞系Hep一2肿瘤干细胞表面标志物 CDl33+细胞比例最高的放疗剂量和检测时间点，为后续试验寻找最佳观 测条件提供参考。 的放射治疗处理后，细胞周期分布情况，发现其放射治疗处理后细胞周期 的变化特点。 最后将上述试验观察的现象和检测测得的数据进行分析和比较，通过 寻找各项指标间的特点和规律，探讨肿瘤干细胞与放疗抵抗现象的关系。 结果： 中文摘要 1．倒置荧光显微镜下定时观察，发现Hep．2细胞接受放射治疗后出 现细胞形态学的变化。首先细胞由正常的多角梭形逐渐变圆，折光性增强， 而后出现为细胞体积变小，胞浆内出现凋亡小体，核分裂相少见，细胞贴 壁差，最后细胞漂浮崩解，呈典型细胞凋亡过程。发生凋亡的细胞数量和 凋亡细胞变化的程度与放射剂量存在剂量依赖关系。 2．MTT法检测发现人喉癌细胞系Hep．2在接受放射治疗处理后，均 出现细胞生长受抑制的情况。表现为细胞增殖抑制率随放射剂量增大而升 高，存在剂量依赖关系；放射治疗后细胞增殖抑制率升高趋势逐渐减缓， 细胞增殖受抑制现象逐渐减弱，细胞增殖能力逐渐恢复。 3．流式细胞术检测发现人喉癌细胞系Hep．2经不同剂量放射治疗后， 各组均出现表达CDl33+细胞比例增高的现象。表现为在一定剂量范围内 后续试验可以选择20Gy组和48h时间点为代表进行试验。 4．应用流式细胞术PI法检测发现，接受放射治疗后的人喉癌细胞系 (68．2％±4．16％)，比例变化趋势为先增加后降低。 结论： 细胞凋亡的形态学特点； 例增