石杉碱甲对血管痴呆小鼠海马乙酰胆碱代谢变化影响的研究.pdfVIP

中文 摘 要 石杉碱甲对血管性痴呆小鼠 海马乙酸胆碱代谢变化影响的研究 摘 要 目的:脑血管疾病是严重危害人类健康的三大疾病之 一，随着治疗方法的不断进步，其病死率逐渐下降，但其造 成的各种精神障碍和智能损害却有增高的趋势。血管性痴呆 (vasculardementia,VD)是由各种脑血管疾病导致的获得 性、持续性智能障碍综合征，是严重危害老年人身心健康的 常见疾病，给社会和家庭带来沉重的负担。因此，VD的防 治日益受到人们的关注。目前，有关VD的发病机制尚不完 全清楚，作为一种改善智能障碍的新药，石杉碱甲已广泛应 用于阿尔茨海默病的治疗，但其治疗VD的药理机制却尚在 探讨中。海马是参与学习和记忆的重要结构。隔内侧核和 Broca斜角带核的胆碱能神经元是海马胆碱能纤维的主要 来源，其释放递质乙酞胆碱 (acetylcholine,Ach)至海马， 参与学习、记忆的形成。脑组织缺血缺氧，影响胆碱醋酶 (acetylcholinesterase,AchE)和胆碱乙酞转移酶 (choline acetyltransferase,CHAT)的分布与含量，从而引起Ach的改 变。本实验通过建立VD模型，观察其海马AchE和CHAT 的变化，探讨VD发病的胆碱能机制及石杉碱甲改善智能， 提高VD患者学习、记忆的胆碱能药理机制。 方法:本研究分为三部分。第一部分以昆明小鼠为研究 对象，采用双侧颈总动脉丝线结扎方法、经连续三次反复缺 血一再灌注，制备VD模型，并设立假手术组、药物组 (石 1 中 文 摘 要 杉碱甲);造模术后第 29,30d，利用跳台试验和水迷宫试 验对各组小鼠分别进行学习和记忆成绩测试，并观察各组小 鼠行为学差异。第二部分采用迅速取材，4%多聚甲醛溶液 固定的小鼠脑组织为研究对象，分别用免疫组化和原位杂交 技术，在光镜下观察各组小鼠海马组织 CHAT和 CHAT mRNA的表达变化，并且计算其海马CAl区CHAT和CHAT mRNA 阳性细胞的面密度值，比较各组海马的表达是否差 异。第三部分以采用快速取材、分离低温保存的海马组织作 为研究对象，比较各组小鼠海马AchE活性有无差别。 结果:(1)跳台试验:模型组小鼠学习、记忆成绩显著 下降，表现为学习阶段的反应时间延长伊0.01)、错误次数 增加((P0.01)，记忆阶段的潜伏时间缩短((P0.01)、错误次 数增加伊0.01):药物组较模型组学习、记忆成绩明显改善 伊0.01)，并且与假手术组比较无差别伊0.05)0(2)水迷 宫试验:模型组小鼠学习、记忆成绩也显著下降，表现为学 习阶段的游全程时间延长和错误次数增加伊0.01)，记忆阶 段的游全程时间延长和错误次数增加((P0.01);药物组较模 型组明显改善伊0.01)，并且与假手术组之间无差别 (P0.05)0(3)海马硫荃染色:假手术组海马硫荃染色显示 海马轮廓清楚、锥体细胞3-5层，数量丰富，排列规则致密， 细胞核圆而大，核仁清晰，胞浆内尼氏体丰富，神经纤维密 集;模型组海马CAl区锥体细胞层次减少，排列松散，锥 体细胞数目减少，胞浆内尼氏体减少甚至消失，细胞核体积 变小，深染，结构不清，呈核固缩表现，神经纤维排列紊乱; 而药物组病理改变明显减轻。(4)海马CHAT及其mRNA 的表达变化:在光镜下，假手术组海马CAl区层次清楚， 一 一 一 一 一 一 z 中 文 摘 要 有大量的阳性神经元，排列紧密，呈棕黄色，胞体较大，圆 形或椭圆形，有的可见突起。而模型组阳性神经元数目明显 减少，排列松散，染色较淡。药物组可见阳性神经元数目较 模型组增多，排列较紧密，染色变深。经过计算阳性细胞面 密度值发现，与假手术组比较，模型组小鼠海马CHAT及 其mRNA的阳性神经元面密度值降低((P0.01)