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中山大学博士后出站报告：碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 专 业： 眼科学 博士后： 凌士奇 合作导师：刘祖国 中文摘要 角膜碱烧伤是最常见的眼化学伤，由于碱性物质能迅速地穿透角膜组织并破 坏深部眼组织，碱烧伤往往造成角膜及眼前段组织的严重损伤而导致永久性视力 缺损。目前有关角膜碱烧伤的研究已引起了广泛地重视并不断地深入。 近来的研究认为免疫系统参与了角膜碱烧伤的病变过程。我们前期的研究发 现碱烧伤角膜中同时存在着新生血管和新生淋巴管。从免疫学角度讲，血管提供 了效应细胞进入的“入口”，而淋巴管则提供抗原提呈细胞进入引流淋巴结诱发 免疫应答的“出口”。因此研究碱烧伤后角膜新生淋巴管的变化对于阐明碱烧伤 后的免疫损伤机制，提高角膜移植预后具有积极的作用。 本课题进一步证实碱烧伤角膜中新生淋巴管的存在，并检测其动态变化；阐 明角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管与血管、炎症之间的关联；定量检测血管内皮生 长因子c(vascularendothelialfactor growthC，VEGF-C)在碱烧伤后角膜中的动 态变化，进一步探讨碱烧伤角膜中新生淋巴管产生的分子调控机理。 中山大学博士后出站报告；碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 第一部分大鼠角膜碱烧伤后的角膜新生淋巴管 目的为碱烧伤角膜中新生淋巴管的存在提供进一步的证据。 方法制备大鼠角膜碱烧伤模型，于烧伤后3d、1w、2w末分别作角膜组织电镜检 vesselendothelial 测、淋巴管内皮细胞受体(1ymphatic 新生淋巴管的状况。 结果电镜检测证实角膜碱烧伤后2w末角膜基质层在存在新生血管的同时，出现 了角膜新生淋巴管．LYVE．I免疫组织化学染色及全角膜荧光法均提示角膜碱烧 伤后3d时即存在着角膜新生淋巴管。 结论角膜碱烧伤后有角膜新生淋巴管生成。 第二部分碱烧伤角膜中新生淋巴管、新生血管及炎症间的关联 目的阐明角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管与血管、炎症之间的关联。 5w、6W、7w、8W末时的角膜新生淋巴管和血管的动态变化，并统计淋巴管数日 vessels vessels (1ymphaticcountin8，LVC)和血管的数I|(bloodcounting，BVC)。髓 (polymorphonuclear Ⅱ 中山大学博士后出站报告：碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 index，tFI)，以评估角膜碱烧伤后角膜炎症的动态改变，并比较及分析碱烧伤后角 膜新生淋巴管、新生血管及角膜炎症之问的关联。 结果角膜碱烧伤后，新生淋巴管的出现滞后于新生血管，碱烧伤后2W末时，两 者同时到达高峰，之后下降，新生淋巴管先于新生血管而消退。新生淋巴管和血 管之间呈高度相关(，卸．965，PO．01)。碱烧伤后，角膜炎症先于新生淋巴管而达 到高峰，新生淋巴管与炎症指数问呈高度正相关驴：0．505，P0．01)，而新生淋巴管 与PMN间呈显著性负相关(r=-0．199，P0．01)。 结论角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管和新生血管、炎症指数问存在着密切地关联。 第三部分VEGF-C在大鼠角膜碱烧伤后角膜中的表达 目的探讨角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管形成的分子机理。 方法制备大鼠角膜碱烧伤模型，免疫组化染色检测烧伤后第1、3、5、7，9、 观测各时间段的碱烧伤角膜中VEGF-CmRNA的变化。 结果免疫组化法提示正常角膜中无VEGF．C阳性蛋白表达，碱烧伤后ld时角 mRNA值为52440．2 示正常大鼠角膜组织中有少量的VEGF-CmRNA表达。VEGF-C mRNA星强阳性表达，为1360679 +2600(拷贝数／嵋)，角膜碱烧伤后3d时，VEGF-C