磷脂酰肌醇-3酶与大肠癌发生及发展的关系研究.pdfVIP

中 文 摘 要 磷脂酞肌醉-3激酶与大肠癌发生及发展的 关系研究 摘 要 目的:大肠癌是我国常见的九类癌症之一，恶性度较 高，包括结肠癌和娜癌。近年来，由于人们生活方式的变 化，特别是膳食结构的改变，大肠癌呈 卜升趋势。虽然，近 年在早期诊断与治疗方法方面有了较大进展，提高了大肠癌 的综合治疗水平，但以总体诊治水平看，五年生存率仍然较 低。传统的观点认为，肿瘤的发生是癌基因激活和抑癌基因 失活所致。近年来的研究发现，许多癌基因和抑癌基因相关 产物均是细胞生长、增殖、分化等信号转导途径的组成成员， 因此，新的观点认为细胞癌变是由于信号转导途径的活性异 常而刺激细胞异常增殖所致。磷脂酞肌醇一3激酶 (phosphoinositide3-kinase,PI-3K)是11年前发现的一种与细胞 内信号传导有关的脂类第二信使 。它能使磷脂酸肌醇的第 三位轻基磷酸化生成磷脂酞肌醇-3-磷酸(ptdins3p,PI3P)a PI-3K主要磷酸化磷脂酞肌醇-4-磷酸(ptdins4,PI4P)和磷脂酸 肌醇-4,5一二磷酸(ptdins4,5p2.PIP2)生成磷脂酞肌醇-3,4一二磷 酸不11磷脂酞肌醇-3,-4,-5一三磷酸(ptdins3,4,5ps,PIP3)，这些脂类 主要是作为第二信使发挥作用。正常情况下，细胞内儿乎不含 有上述脂类，一旦细胞受到刺激，它们就迅速被诱导产 生.PI-3K是细胞内一种重要的分子，它与多种生物学事件有 关，如囊泡运输 、细胞骨架重组 、细胞存活 、肿瘤发生 、 细胞凋亡 等。在人类发生的肿瘤中，己发现PI-3K级联信 中 文 摘 要 号途径的各成员具有基因结构、蛋白表达和激酶活性等方面 的异常改变。经典的 PI-3K途径由PI-3K,PKB/Akt和 p70s6k组成。PI-3K包括两个活性亚单位，即p110催化亚 单位和 p85调节亚单位。在各种生长因子与激素作用下， 如 :成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactorFGF),胰 岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactorIGF)、转化生长因 子 (transforminggrowthfactorTGF)等，两个活性亚单位可 与相应的结合蛋白偶联，使PI-3K活化，从而转导细胞增殖、 分化、转化和抗调亡等与癌症发生密切相关的信号。PI-3K 作为PI-3K级联信号途径的重要成员，在胞膜与胞质之间具 有信号传递作用。日前己发现其在人类乳腺癌、卵巢癌和结 肠癌中有蛋白表达和活性的改变。本研究采用流式细胞分析 技术，对大肠癌患者手术切除标本中蛋白表达和细胞增殖情 况进行了研究，探讨了PI-3K与大肠癌发生及发展的关系， 试图进一步探讨大肠癌发生及其转移机制，并为大肠癌的治 疗开辟新的途径。 方法:1材料:选取河北医科大学第四临床医院外二科 2003年9-12月间住院行外科手术治疗的大肠癌患者15例， 分别取其肿瘤组织与相应正常组织，正常组织距肿瘤边缘至 少 10厘米。所有标本均经术后病理证实。标本均于离体半 小时内采集,95%乙醇固定，置-70℃冰箱内保存。 2流式细胞仪检测PI-3K的蛋白表达和大肠癌细胞增殖 指数(PI=S+G2M/GO/G1+S+G2M):将it常和大肠癌组织制 成单细胞悬液，分别取1X10/ml,加入羊抗人PI-3K抗休0.1 毫升，室温孵一育30分钟，加入PBS10毫升洗济一次，弃上 清，加入羊抗鼠FITC-IgG二抗100微升，避光室温孵育30 中 文 摘 要 分钟，加入PBS10毫升离心，然后加入PBS0.1毫升经500 目铜网过滤。取两份同等数量的细胞，一份由流式细胞仪检 测PI-3K的蛋白表达.另一份经EB染色后上机检测细胞增殖 指数。 结果:PI-3K在正常大肠组织及癌组织中均有表达，但 在15例正常大肠组织中表达率为80%，而在15例癌组织中， 表达率为100%，并且 15例癌组织的表达量均明显高于其相 应的正常组织中的表达量，差异有显著性 (p0.05)。伴淋 巴结转移的大