3大肠菌群11讲解.pptVIP

大肠菌群检测注意事项 在检测该菌时易出现的问题： 1、LST、BGLB、EC等在灭菌时小倒管中气泡排不尽。 2、气泡不易观察。 3、VRBA、DC平板上菌落特征不易辨认。 原因： 1、在分装LST、BGLB、EC时，小倒管中有气泡；此外，高压灭菌后，需急排气，然后迅速冷却。 2、观察气泡时，要对光倾斜试管观察。 3、熟悉大肠杆菌、大肠菌群在上述平板上的特征,必要可做一些阳性的对照。有些食物残渣会影响观察结果，这样需要我们在培养前仔细观察平板的状态，大的食物残渣可以做一些标记。 灭菌后小倒管内留有气泡原因及解决办法 原因一：高温高压灭菌锅工作压力不够，使气体不能完全排出 高压锅在灭菌过程中产生的最大压力不够，不能将小倒管内的气体挤出，导致灭菌后任留有小气泡。此外，高温高压灭菌锅若是温度上升缓慢或者达不到灭菌温度，也会出现类似现象。 解决办法：使用检查灭菌效果的用品－压力蒸汽灭菌指示卡，对高温高压灭菌锅的灭菌情况进行监测。 灭菌后小倒管内留有气泡原因及解决办法 原因二：试管塞塞得太紧 在灭菌时，试管塞塞得太紧（有些硅胶塞与试管不配套）会导致试管内压力与灭菌锅内压力不一致。当灭菌锅升温升压时，锅内压力会大于试管内压力，试管内压力不够，不能将小倒管内气体排尽，就留有气泡；当灭菌锅降温降压时，锅内压力小于管内压力，可能会使试管塞和培养基崩出，培养基报废。 解决办法：改用塑料帽、不锈钢管帽，或者与试管相匹配的硅胶塞。 灭菌后小倒管内留有气泡原因及解决办法 原因三：小倒管口太小 小倒管在加热加压后，一方面液体培养基要进入小倒管，另一方面小倒管内部的空气要被排出，如果小倒管管口太小，液体不容易进去，里面的空气不容易被排出，就会导致有小气泡生成。 解决办法：改用开口比较大的倒管。 以上提供几种可能形成气泡的主要原因，还有几点建议： 1.可以在高压锅压力降下来后，温度不太高的时候将培养基从锅中拿出，迅速放在冷水中，急冷，注意要使冷水高度超过试管中液面高度。利用热胀冷缩的原理，可以使小倒管中气泡排出。 2.若使用非全自动高温高压灭菌锅（此类锅一般需要在100℃手动关闭放气阀），则不要在锅刚达到100℃时就关闭放气阀，可以让高压锅在100℃时多排一会儿热气，这样有助于小倒管中气体排出。 此外，尽量不要采用将灭菌后的试管颠倒或大角度倾斜的方式，使小倒管内气体排出。此种方法可能会导致培养基通过试管口或试管塞受到污染，或者导致试管内液体流出。 提高大肠菌群检出率的措施 1、小于30的液体样品，取原液10ml、1ml和1：10稀释液1ml接种。 2、若小管中无气泡应轻轻振摇试管，若有气泡上升也算产气。 3、平板上深紫色带金属光泽的和深紫色的菌落都是典型菌落；若没有典型的菌落，红色、粉色菌落也是可疑菌落。 4、若平板上无典型菌落，应挑选3--5个红色或粉色的革兰氏阴性无芽孢杆菌菌落混合接种于乳糖发酵管中。 VRBA琼脂： * 这分别是未接种检样时的LST肉汤和乳糖胆盐肉汤。左边 ★ ★ ★ 3 管浅黄色的是LST，右边 ★ ★ ★ 3管紫色的是乳糖胆盐肉汤 * 这是进行同样的接种和培养后的的LST肉汤和乳糖胆盐肉汤。同样也是 ★ ★ ★ 左边LST， ★ ★ ★ 右边是乳糖胆盐肉汤。 ★ ★ ★ 可以观察到细菌生长和倒管中的产气情况。 刚才我们已经谈到，LST中的选择性抑菌剂是月桂基硫酸盐，乳糖胆盐肉汤中的选择性抑菌剂是胆盐。由于胆盐与酸产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难。 从这个照片上，我们也可以看出来，在同样的接种和培养条件下，左边的LST更容易观察一些。 * 就是结果报告的单位不同 ★ ★ ★ 原方法是每 100g(mL)的 MPN值；现方法是每g(mL)的 MPN 值。 * 现在标准里所给出的MPN表要简化一些，那么为什么要做如此的改变呢？我们将在后面的讨论中提到这个问题。 ★ ★ ★ 再一个修改是标准名称的修改，原来叫大肠菌群测定，现在叫大肠菌群计数。 * 这就是大肠菌群计数MPN法的操作程序图。可能有点小，看不清楚。下面是具体操作步骤。 * 这是未接种培养时的煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管 * 这是培养后大肠菌群阳性的煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管，由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸生成的酸而形成胆酸沉淀，所以比较浑浊，而且也可以看到管底的沉淀。 * 这是标准中所给出的MPN表，这张幻灯片里只显示出了部分内容，这个表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准所通用的MPN表。至于为什么都使用这个MP