本氏针茅SRAPPCR反应体系的建立及引物筛选.pdfVIP

卷 期 草 业 科 学 本氏针茅反应体系的 建立及引物筛选 井赵斌 俞 靓 魏 琳 程积民 西北农林科技大学动物科技学院陕西 杨凌 西北农林科技大学资源与环境学院陕西 杨凌 中国科学院水利部水土保持研究所陕西 杨凌 摘要以本氏针茅 幼嫩叶片为材料建立适合本氏针茅基因组 提取的改良 法在此 基础上采用正交试验设计和单因素分析相结合的方法对本氏针茅 反应体系中的 个主要因素 酶 和引物进行优化旨在建立适合本氏针茅 分析的反应体系结果表明在 总的反应体系中各组分的加入量分别为 酶 引物 体系验证和引物筛选试验表明该体系适于本氏针茅遗传多样性分析该体系的建立可为本氏针茅种质 资源遗传多样性研究和黄土高原植被恢复及生态建设提供理论基础 关键词本氏针茅 体系优化引物筛选 中图分类号 文献标识码 文章编号 本氏针茅 为禾本科 已有较多报道 已有的研究基本上以内蒙古草 针茅属多年生草本植物又叫长芒草俗称 原为主体对全国其他生态分布区的研究基本上属 蓑草广泛分布于我国西北华北西南和东北各地 于空白研究所用的标记以 和 标 亚洲中部及北部也有分布是黄土高原典型草原的 记为主 标记 代表性植物和优势种植物其根系发达须根较多 相关序列扩增多态性是由 和 草质柔软营养丰富适口性好是一种牲畜较喜食 于 年开发的一种基于 的新型 的天然牧草同时又是优良的水土保持植物 以 随机引物标记系统 目前 标记已被成功用 本氏针茅为优势种和建群种的典型半干旱气候带的 于遗传多样性分析遗传图谱构建 定位分析 云雾山草原自然保护区为我国黄土高原保留最完 品种鉴定和杂种优势等的研究 中结果表明较 整面积最大原生性最强的典型区域国内外对针 等标记具有更丰富的多 茅属植物分子水平的研究较多但国内对本氏针茅 态性且操作简便重复性高成本较低特别是对序 光合生理生态学方面的研究报道较少 尚未见基 列信息未知的物种省去了开发引物的过程 于分子生物学基础的研究报道 本研究以黄土高原区本氏针茅为材料在建立 基于 分子水平上的植物遗传多样性和遗 适于本氏针茅 提取方法的基础上采用正交 传分化在物种多样性保护中的作用已得到公认 目 试验设计和单因素分析相结合的方法对 反 前对林草的遗传多样性研究由以濒危稀有物种为 应体系进行优化在最优反应体系建立的基础上对 主逐渐向以优势种和建群种并重发展优势种和建 部分 引物进行了多态性筛选以期为利用 群种遗传多样性的研究不但对物种的保护和利用具 标记进一步开展本氏针茅种质资源遗传多样 有重要意义而且可以为生态系统遗传健康的评估 性研究和黄土高原植被恢复及生态建设提供理论基 提供基础国内外对针茅属植物遗传多样性的研究 础 收稿日期 接受日期 基金项目中国科学院重要方向项目 国家重点基础研究发展计划 项目 国家自然科学基金重 点项目 农业部现代农业产业技术体系建设专项资金 作者简介井赵斌 男陕西蒲城人在读博士生研究方向为旱区草地生态恢复 通信作者程积民 材料与方法 料袋密封置冰盒中带回实验室存于 冰箱 材料 供试材料于 年 月采自陕西 中备用优化体系材料为采集于陕西铜川和宁夏固 宁夏内蒙古和甘肃不同生态分布区表 采样 原云雾山的本氏针茅资源编号分别为 和 单因素筛选试验材料为陕西铜川 时同一生态区不同个体之间的距离保持在 以 本氏针茅编号为 体系验证材料为甘 上每个样品选取幼嫩无病斑叶片采集编号后装塑 表 供试材料 编号 采样位置 海拔 生境 建群种 陕西铜川金华山 森林草原 白羊草 铁杆蒿 宁夏云雾山南山 本氏针茅 典型草原 铁杆蒿 大针茅 甘肃环县芦家湾乡 本氏针茅 典型草原 铁杆蒿 百里香 宁夏西吉县偏城 典型草原 本氏针茅 铁杆蒿 宁夏黄峁山 典型草原 本氏针茅 茭蒿 宁夏河川 吕平 典型草原 本氏针茅 百里香 宁夏云雾 山退化草地 典型草原 本氏针茅 宁夏 六 盘 山 典型草原 本氏针茅 内蒙古鄂托克城川镇 荒漠草原 芨 芨 草 内蒙古鄂托克马长街 荒漠草原 本氏针茅 陕西靖边罗大滩 荒漠草原 短花针茅 内蒙古鄂托克马长街 荒漠草原 猫头刺 宁夏盐池古王镇高沙窝 荒漠草原 本氏针茅 甘肃靖远 典型草原 本氏针茅 草 业 科 学 第 卷 期 肃宁夏和内蒙古选出的 个采样点中的 个单 保存母液和工作液于 冰箱中备 株编号 分别 为 用 反应体系的优化 引物参 和 引物筛选从 个 考 和 等 和 等 发表的 省区中各选取 个采样点不同生态区中的 个单 引物序列共 条正向引物和 条反向引物表 株编号分别为 引物由上海捷瑞生物工程公司合成用于体系优化 和 的引物组合为 材料 和 方法 材料 体系验证的引物组合为 材料 提取及检测 取采集的本氏针茅幼嫩 材 料 叶片参考文献 的方