食品微生物检验(大肠杆菌全部)詳解.doc

第三章 大肠菌群测定 一、大肠菌群检验 (一)检验方法 (二)培养基 (三)检验时应注意事 二、大肠菌群的卫生学意义 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫1974年全1976年全国食品卫生标准会议建议以大肠菌群作(包括快速检验方法)及其卫生学意义进行了 在这次修订l976年版食品卫生检验方法的过程中，大肠菌群科研协作组又于1983～1985年对大肠菌群检验方法进行了实验研究，并作了对比观察，同时对国内常用的大肠 大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出来的一组与37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。有些科学工V～P、柠檬酸盐、硫化氢、明胶、动力和44．5℃乳糖分解等试 一、大肠茵群检验 (一)检验方法 1．乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生l m J以lm1及1mI以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释3管，置36±l℃温箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则 2．分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±l℃温箱18～24小时，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。 3证实试验。在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落l～2个进行革兰氏染色，同时 图3-I大肠菌群检验程序 (=)培养基 1．乳糖胆盐发酵培基 成分：蛋白胨 猪胆盐(或牛，羊胆盐) 乳糖 ．、 0．04％溴甲酚紫水溶液 蒸馏水 ’ pH7．4 制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中， 并放入一个小倒管，高压灭菌115℃15分钟。 20g 5g ‘ 1 Og 25m1 1 000m1 校正pH，加入指示剂，分装每管l 0ml， 附注：双料乳糖胆盐发酵培基除蒸馏水外，其他成分加倍。 用途：乳糖发酵试验用。 原理：细菌分解糖类是依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用，细菌产生的分解糖 接种乳糖发酵管，置36±1℃　　温箱内培养24±2小时，观察产气情况。凡乳糖管产气，革 兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。 4．报告。根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每l 00ml(g)大 肠菌群的最可能数。 5．检验程序。见图3-1 类的酶，随细菌种类不同而异，可以此来鉴别细菌。 乳糖是双糖，细菌分解双糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳 糖发酵试验主要是测定细菌分解糖类以后所产生的酸，以培基pH降低(指示剂变色) 大肠杆菌等细菌在酸性环境中，由于甲酸脱氢酶的作用，可使甲酸分解成CO和H2， 注：常用于供发酵试验的各种糖类、醇类和糖苷类(见3-1)· 2．伊红美蓝琼脂培基 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 17g 2％伊红Y溶液 20ml 0．65％美蓝溶液 10ml 蒸馏水 1000ml pH71 制法：将蛋l白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，高压灭121℃15分钟备用。临用时加入乳糖，并加热溶化琼脂，冷至50一55℃，加入伊红和美 原理：大肠菌群细菌发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝结合而成黑色化合物，故菌落呈(如沙门氏菌、志贺氏菌)则为无色菌落。 3．乳糖发酵培基 成分：蛋白胨 20g 乳糖 10g O．04％溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸馏水 1000ml pH7．4 制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml或3ml，并放入一个小倒管，高压灭菌115℃15分钟。 附注： ’ (1)双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。 (2)30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用．3ml乳糖发酵管供大肠菌群 4．蛋白胨水 成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 1 000ml pH7．4 化学上的分类 名 称 戍糖(C5H10O5) 已糖(C6H12O6) 双糖类(C12H22O1