骨外科基因治疗课件.ppt

研一3班 骨外科 骨科基因治疗简述 第5小组成员：演讲：王琛 制作：朱梁 张向征、孟柏屹、丁亚军 、王鹏飞 宋通渠 、黄长智、高啸、徐峥、王琛 Table of Contents 1 基因治疗概述 2 骨科基因治疗现状 3 动物实验研究 4 临床研究 5 基因治疗在骨质疏松性骨折中的运用 （重点） 基因治疗概述 基因治疗(gene therapy)是将某种形式的核酸转入患者体细胞内以减轻疾病的过程。就是把由一个或几个基因及其调控序列转移(gene transfer)到靶细胞并发挥遗传物质的作用以治疗疾病。 步骤： 基因治疗概述 基因载体 基因治疗概述 基因治疗目的： (1)替代缺损基因； (2)加强常规基因的功能； (3)在DNA或RNA水平阻断致病基因的作用。 基因治疗的根本点是使内源细胞产生特殊蛋白 其包含4个关键步骤：转导、转录、翻译、表达。 骨科基因治疗现状 骨科基因治疗是分子生物学在骨科领域的重要应用，是极有前途的一种治疗方法，但目前仅限于实验室阶段，距离临床大量应用尚有一段距离（仅个别疾病开始了局部基因治疗的初期临床研究）。 本小组成员阅读大量有关文献，从动物实验研究与临床研究两方面进行简单介绍，重点叙述基因治疗在骨质疏松性骨折中的运用。 动物实验研究 一、骨愈合的基因治疗 目的基因只需在骨诱导早期数天或数周短期表达以启动骨诱导即可。目前促进骨愈合基因治疗的热点集中在BMP-2 、7 、9 基因在脊柱融合、长骨缺损中的应用。 将目的基因导入基质细胞,不仅可以提供目的基因表达产物,自身还可被诱导分化为骨祖细胞以弥补局部骨前体细胞的不足。 BMP-2电泳 结果 经过转导后结果对比 二、椎间盘疾病的基因治疗 IVD 特有的解剖结构以及低氧、低营养、低pH 值的生理环境更适合活体直接转基因术的应用。（未来方向） 三、肌腱和韧带的基因治疗 腺病毒作为载体较为适宜。 Hart 等将重组了反义核心蛋白聚糖核苷酸的HVJ / 脂质体注入兔的内侧副韧带损伤处。 实验结果显示基因治疗有助于腱愈合和避免腱粘连 动物实验研究 四、关节和软骨的基因治疗 滑膜覆盖了关节囊的所有内表面,故滑膜内衬细胞是较为理想的靶细胞。 Frisbie等将Ad-EqIL-1Ra 注入马的OA 关节内,术后关节评分显著增高,关节滑液渗出减少,关节病变程度减轻。 基因转染治疗骨性关节炎 动物实验研究 五、脊髓和周围神经损伤的基因治疗 由于髓磷脂的抑制作用、神经胶质瘢痕形成和细胞死亡,脊髓损伤后几乎没有自发性的再生。 Ad-NGF、Ad-FGF-2 注入损伤背根的神经胶质中FGF-2 或NGF 的表达诱导了明显的局部轴突生长,温度觉基本恢复正常。 临床研究 目前骨科基因治疗的临床研究仅限于RA 的基因治疗。在有效性和安全性试验的基础上,1996 年美国开展了第一例基因治疗RA ,它不仅是首例基因治疗的骨科疾病, 也是首次应用基因治疗非致命性疾病。 另有二个临床试验是在关节内转导单纯疱疹病毒携带的胸苷激酶基因,表达产物促使滑膜细胞凋亡,进行“基因滑膜切除术”。 基因治疗在骨质疏松性骨折中的运用 40岁人群 骨质疏松症 男性 11.15 % 女性 19.19% 低骨量的患病率 男性 45.18% 女性 32.14% 一、骨质疏松性骨折的愈合能力较差： 老年人缺乏间充质干细胞, 且功能低下；来自骨质疏松症患者的细胞比正常细胞合成更少的Ⅰ型胶原纤维。 二、促进骨质疏松性骨折愈合的必要性： 将大大降低由于内固定失败和长期制动而产生的并发症的发生率。 骨折愈合中的重要基因产物 　生长因子 大多数实验聚焦在转基因表达骨形成蛋白( BMP) 的使用上。BMP-2 和BMP-7 cDNA具有克服调节屏障的优势而用于临床,最新研究显示BMP - 6 和BMP - 9 cDNA 是更有效的成骨性因子 　转录因子 LIM矿化蛋白- 1 (LMP - 1) , 其在啮齿类动物中, 低浓度时促进成骨并能引起脊柱融合。 　其它细胞因子 大多数细胞因子的作用在于增加骨形成, 从而促进骨折的早期愈合。 实验研究显示:给予IL - 1 受体拮抗剂( IL - 1RA) 或一种可溶形式的TNF - 1 受体能引起去卵巢大鼠或小鼠的骨丢失。 基因治疗在骨质疏松性骨折中的运用 三、基因治疗 骨质疏松性骨折的基因治疗正在探索,目前大多数的研究都处在动物实验阶段, 但却展示出诱人的前景, 主要采取的方式有两种: 一