第一章 蛋白质讲解.ppt

因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。 分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成 测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种氨基酸残基 把肽链水解成片段，分别进行分析 测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用Edman降解法 一般需用数种水解法，并分析出各肽段中的氨基酸顺序，然后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。 三、多肽链中氨基酸序列分析 胰蛋白酶 Lys、Arg 羧基形成的肽键 胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶） 芳香族氨基酸 羧基形成的肽键 Phe、Tyr、Trp 溴化氰 Met 羧基形成的肽键 按照三联密码的原则推导氨基酸的顺序 分离编码蛋白质基因的mRNA 逆转录生成cDNA 测定cDNA序列推导mRNA顺序 通过核酸来推演氨基酸序列 * 二级结构测定 通常采用圆二色光谱(circular dichroism，CD)测定溶液状态下的蛋白质二级结构含量。 ?-螺旋的CD峰有222nm处的负峰、208nm处的负峰和198 nm处的正峰三个成分；而?-折叠的CD谱不很固定。 四、蛋白质空间结构测定 * 三级结构测定 X射线衍射法(X-ray diffraction)和核磁共振技术(nuclear magnetic resonance, NMR)是研究蛋白质三维空间结构最准确的方法。 * 用分子力学、分子动力学的方法，根据物理化学的基本原理，从理论上计算蛋白质分子的空间结构。 * 通过对已知空间结构的蛋白质进行分析，找出一级结构与空间结构的关系，总结出规律，用于新的蛋白质空间结构的预测。 根据蛋白质的氨基酸序列预测其三维空间结构 * 学习方法 望文生义秘法 * 肽键的形成 * * * * * * * * * * 血红蛋白的氧饱和曲线 当血红蛋白的一个?亚基与氧分子结合以后，可引起其他亚基的构象发生改变，对氧的亲和力增加，从而导致整个分子的氧结合力迅速增高，使血红蛋白的氧饱和曲线呈“S”形。 由于蛋白质分子构象改变而导致其生物学功能发生改变的现象称为变构效应（别构效应）。 重要概念：allosteric effect 蛋白质分子构象改变与疾病 已知有20多种疾病的发生与蛋白质分子构象的错误直接相关，包括帕金森病、阿尔茨海默病、朊蛋白病(疯牛病)、囊性纤维化、成骨不全症等。 疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。 PrPc α-螺旋 PrPsc β-折叠 正常 疯牛病 疯牛病中的蛋白质构象改变 Conformation of Prion Protein PrPc PrPsc 蛋白质分子的结构层次 Summary 第三节 蛋白质的理化性质 The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein （一）蛋白质的两性电离 酸性和碱性氨基酸残基的侧链基团 等电点( isoelectric point, pI) 一、理化性质 布朗运动，丁达尔现象，不能穿过半透膜 * 蛋白质胶体稳定的因素 颗粒表面电荷 水化膜 （二）蛋白质的胶体性质 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的聚沉 * 蛋白质的变性(denaturation) 特定的空间构象被破坏： 理化性质改变和生物活性的丧失 变性的本质 —— 破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。 （三）蛋白质的变性、沉淀和凝固 变性蛋白质的性质改变： ① 物理性质：旋光性改变，溶解度下降，沉降率升高，粘度升高，光吸收度增加等； ② 化学性质：官能团反应性增加，易被蛋白酶水解。 ③ 生物学性质：原有生物学活性丧失，抗原性改变。 应用举例 临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。 此外, 防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) 。 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 * 蛋白质沉淀 蛋白质从溶液中析出的现象。 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 * 蛋白质的凝固作用(protein coagul