第一章微生物工程菌种讲解.pptVIP

将待测菌株接种于蛋黄培养基平板上培养，在菌落周围产生晕圈（溶脂圈和透明圈）的菌株作为定性筛选解有机磷细菌的判断依据，以晕圈直径与菌落直径比例的大小作为解磷能力大小初筛的判定指标 二、 诱变育种 ?　诱变育种就是人为地利用物理或化学等因素，使诱变 对象细胞内的遗传物质发生变化，引起突变，并通过筛选 获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。 ? 诱变育种不仅可以提高菌种的生产能力，且可改进产品 质量、扩大品种和简化生产工艺。 ? 目前发酵工业中应用的生产菌株大部分是诱变育种得来的。以青霉素为例，1943年开始生产时的效价仅为20U/ml，通过多次诱变育种现已达50000-100000U/ml。 虽然遗传工程等新的育种方法迅速发展，但诱变育种仍是目前广泛使用的育种手段。 诱变育种的一般步骤 原始菌株（出发菌株） 细胞或孢子悬液制备 活细胞计数 诱变剂处理 活细胞计数 中间培养 突变株分离 初筛 复筛 生产性能试验 诱变预备处理 诱 变 育 种 的 工 作 程 序 一） 细菌杂交育种 转导 转化 接合 三、杂交育种 * 第二节 菌种来源 微生物工程工业生产水平 的三个决定要素: 生产菌种的性能 发酵和提取工艺条件 生产设备 获得优良的生产菌种是实现高水平微生物工程工业生产的第一环节. 一、菌种分离与筛选工作程序 发酵工业上使用的微生物菌种，最初都是从自然界中分离筛选出来的。 分离与筛选菌种的具体做法一般分4个步骤： 样品采集 增殖培养 纯种分离 生产性能测定 调查研究（包括资料查阅） 试验方案设计 采样 第一次增殖培养 第一次平板分离 第二次增殖培养 第二次平板分离 增殖条件探索 根据实际情况进行定量或半定量测定 第一次原种斜面 第二次原种斜面 初筛（1株1瓶） 定量或半定量测定 筛 选 工 作 程 序 第三次平板分离 第三次原种斜面 复筛 第四次平板分离 不纯 第四次原种斜面 再复筛 种子培养 初步工艺条件摸索 较优菌株 1株3-5瓶 保藏及进一步做生产性能试验或作为育种的出发菌株 某些必要试验和毒性试验 第三次菌种保藏 二、分离与筛选的设计要求 在筛选所需菌株时应考虑以下一些重要指标： 1、菌的营养特征 一般要求采用廉价的培养基或使用来源丰富的原料 2、菌的生长温度 3、菌的稳定性 4、菌的产物得率和产物在培养液中的浓度 5、菌对所采用的设备和生产过程的适应性 6、容易从培养液中回收产物 3-6是用来衡量菌种的生产性能，如能满足这几条，便有希望成为效益高的生产菌株 三、含微生物样品的采集 较复杂；应根据分离目的灵活掌握 土壤（丰富、 5-25cm、土质、酸碱度、植被状况、地理条件、季节） 食品 、海水、动物、植物、极端环境 根据微生物的营养类型采样 森林土中有相当多枯枝落叶和腐烂的木头，富含纤维素，适合利用纤维素作碳源的纤维素酶产生菌生长。 肉类加工厂附近、饭店排污沟，易分离到蛋白酶和脂肪酶产生菌。 面粉加工厂等场所易分离到产淀粉酶、糖化酶的菌 根据微生物的生理特性采样 筛选高温酶产生菌通常从温泉、火山爆发处、堆肥等采样； 筛选产低温酶的微生物，可从冰窖、南极、深海等采样 分离耐高渗透压酵母菌，可到甜果、蜜饯、甘蔗渣堆积处采样 杨尺蠖 赤松毛虫 侧柏毛虫 四、含微生物样品的富集培养 富集(enrichment)培养 是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利分离到所需的菌株。 其要领是提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条件。包括：控制培养基的营养成分；控制培养条件；抑制不需要的菌类等。 控制氧可将好氧微生物和厌氧微生物分开； 高温下培养可将嗜热微生物和非嗜热微生物分开； 控制pH可分离嗜酸或嗜碱微生物； 高糖或高盐培养基可分离耐高渗透压微生物； 根据微生物对环境因子的耐受范围具有可塑性的特点，可通过连续富集培养的方法分离降解高浓度污染物的环保菌。 如降解苯胺的微生物分离。可以苯胺为唯一碳源对样品进行富集培养，待底物完全降解后，再以一定接种量转接到新鲜的含苯胺的富集培养液中，如此连续移接培养次数。同时将苯胺浓度逐步提高，并可得到降解苯胺占优势的菌株培养液，采用稀释涂布法或平板划线法进一步分离，即可得到能降解高浓度苯胺的微生物。 ? 需注意，所需菌型生长的结果有时会改变培养基的性质，从而改变选择压力。 ? 重复移植几次后接种少量已富集的培养物到固体培养基上。 ? 移植时间是关键，应在所需菌种确已占优势的情况下进行。 五、利用固体平板的生化反应进行分离 ? 利用特殊的分离培养对大量混