菌种选育保藏与复壮讲解.ppt

菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 国内外菌种保藏机构： 第三节 国内外主要的菌种保藏机构 中国微生物菌种保藏管理委员会CCCCM 普通微生物菌种保藏管理中心 中国科学院微生物研究所（AS）：真菌、细菌 武汉病毒所（AS-IV）：病毒 农业微生物菌种保藏管理中心 农科院土壤肥料研究所（ISF） 工业微生物菌种保藏管理中心 中国食品发酵工业科学研究所（IFFI） 抗生素菌种保藏管理中心 中国医学科学院抗生素研究所（IA） 四川抗生素工业研究所（SIA）：新抗菌种 【目的】用来分离单一菌落或用来估计样本中微生物的数目。 3．目的基因与载体的连接 得到目的基因与载体后，把它们相互连接即进行体外人工重组，其连接有4种方式。 (1)黏性末端连接 (2)平头连接(平齐末端连接) (3)同聚末端连接——加接头 (4)人工接头(人工黏性末端) 4．重组DNA引入宿主细胞 重组DNA只有进入受体细胞才能进一步实现扩增和表达。 ? 5．重组体的筛选和表达产物的鉴定 (1)重组体的筛选 (2)表达产物的鉴定 （三）微生物基因工程的应用 1、常规发酵工业 可通过基因工程获得工程菌。 2、提高菌种产量 3、生产重要药物中间体的工程菌 4、基因工程药物开发 5、环保、生物固氮等。 第二节 菌种保藏与复壮 菌种保藏：(1) 目的：①存活，不丢失，不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种(2) 原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺乏营养 以及添加保护剂等） 二. 菌种的复壮 rejuvenation 狭义复壮 在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施； 广义复壮 在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种，也称生产育种。 菌种的复壮（rejuvenation）：使衰退的菌种恢复原来优良性状。 菌种的复壮措施：①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。 ②通过寄主体内生长进行复壮（如Bt、白僵菌、多角体病毒等的复壮） ； ③淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。④采用有效的菌种保藏方法。 （1）划线法：简单、快捷。 （2）稀释法：菌落单一均匀。 纯种分离方法 一、固体培养基四区划法接种法 接种针先以火焰灭菌法灭菌 步骤一 轻触营养平板上无菌的琼脂处冷却 步骤二 以接种针轻触菌落，使接种针上沾有细菌。 步骤三 更换一个新的无菌营养平板 步骤四 将接种针上的细菌划于一个新的营养平板上。此为第一菌区 。 步骤五 重复第一步骤，将接种针以火焰灭菌法灭菌，然后轻触琼脂无菌处冷却。 步骤六 由第五步骤的第一区中划出第二区，如右上图。 步骤七 重复第六以及第七步骤，由第七步骤的 第二区中划出第三区，如右上图。 步骤八 重复第六以及第七步骤，由第八步骤的第三区中划出第四区，划满剩下的空间。完成后的营养平板，如右上图。 步骤九 在营养平板上贴好标签，标示好接种日期、操作者姓名、菌种学名以及培养基名称。 步骤十 固体培养基的稀释涂抹接种法 需要使用的仪器——震荡机 吸取准备好欲稀释的菌液 取含有 9mL无菌水之试管，将试管口过火灭菌。 将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。 将试管于震荡机上，使菌液混合均匀 取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL， 加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。 重复此步骤直至所需要的稀释浓度。 从最后稀释菌液中吸取 0.1mL菌液，置入准备好的无菌琼脂内。 将三角玻璃棒浸于酒精中 将三角玻璃棒在火焰上燃烧 （须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧） 使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。 4. 生产性能的测定 一般采用两步法： 初筛：以量为主 复筛：以质为主 食品发酵与酿造工艺学 第二章 食品发酵与酿造工艺学 第二章 五、原生质体融合 定义： 通过酶解作用将两个