NMDA受体-亚单位磷酸化在新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用机制.pdfVIP

摘要 Ischemic NMDA)型谷氨酸受体的激活在缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic Brain Damage，HIBD)的病理生理过程中占据着十分重要的地位。本 研究的目的是了解NMDA受体．1亚单位(NRI)磷酸化在新生 Sprague．Dawley(SD)大鼠HIBD中的作用机制。 方法：7日龄SD大鼠随机分为正常对照组、缺氧缺血(HIBD) 组(HIBD动物模型制作采用右颈总动脉结扎并低氧吸入的方法)和 NMDA微量注射组。应用TTC染色了解脑组织损伤大体情况；应用 免疫荧光组化染色和Western 表达；应用流式细胞仪技术测定各组脑细胞线粒体膜电势(△、壬，m)变 化规律，了解其线粒体受损程度；应用荧光光谱仪进行细胞内游离钙 析，PO．05时被认为具有统计学意义。 结果： (1)正常对照组：TTC染色呈红色，免疫组化染色和WesternBlot ±52．36)nn]oI／L，左右大脑半球△、王，m及[Ca”】i基本相等。 红色受损脑组织，HI后24h和48h时损伤最严重、其损伤容积与全 差异有统计学意义，之后脑组织损伤开始恢复；HI损伤使NRI阳性 其中12h、24h阳性细胞数与正常相比较差异有统计学意义(pO．05)； Blot表达呈进行性减弱，HIBD后6h、 phospho．NRI$897的Western 12h和24h的发光条带密度值与正常相比分别降低22．2％、65．7％和 意义(P0．05)；HI损伤侧△甲。则呈现“降低．恢复．再降低．再恢复． 再降低”的改变，右侧：左侧△甲。比值在HI后0、4、24h出现3次降 低，分别为(0．80士0．17)、(O．704-0．22)、(O．71士0．13)，变化最明显 55．78)nmol／L，明显高于正常新生鼠且差异具有统计学意义 (PO．05)。 (3)NMDA微量注射组：注射后O．4h内TTC染色均大致正常； Blot表达与HIBD组类似。 免疫组化染色、【Ca2+玉的改变和Western 免疫组化染色结果显示NRl阳性表达细胞数逐渐增多，注射后lh 学意义(尸0．05)；丘脑区和海马回NRI的WesternBlot表达明显 增强、Phospho，NRl$897表达明显减弱。 结论：(1)NRl$897位点的磷酸化使7日龄新生大鼠脑皮质神 经细胞具有正常生理功能；HI损伤使NRi$897位点的磷酸化表达进 行性下调，细胞不能发挥正常功能；(2)NMDA注射可诱导与HI损 伤类似的变化，进一步证实了缺氧缺血性脑损伤中“HI—NMDA— 减轻HI脑损伤的新途径提供实验依据。 关键词NRI，磷酸化，缺氧缺血，新生鼠，脑 ABSTRACT Theactivationof plays rolesinthe of brain ischemic important pathogenesishypoxic damage ofthis isto themechanismsof (HIBD)．Theobjectivestudy explore NMDA inHIBDinneonatal receptor1(NRl)phosphorylation Sprague-Dawley(SD)rat． Method：Postnatal were 7 DaySprague-Dawley(SD)ratsrandomly dividedin