Nrf2ARE号通路在ALS转基因小鼠模型中的研究.pdfVIP

中文摘要 Nrf2／ARE信号通路在ALS转基因小鼠 模型中的研究 摘 要 目的：1993年，RosenDR等发现，部分家族性肌萎缩 侧索硬化(fALS)的发病与编码铜／锌超氧化物歧化酶(Cu／Zn SOD)的SODI基因突变有关。该发现为我们提供了一个明确 的运动神经元死亡的原因。到目前为止，已确定在20％fALS 其突变数目已超过100种。其中，93位的甘氨酸(Gly)突变为 丙氨酸(Ala)为常见的突变之一。转染了人突变SODl基因的 转基因小鼠具有与ALS病人相同的临床表现，现己成为国 际公认的研究ALS的理想模型。 在ALS病人及转基因动物模型内均存在蛋白质、脂质和 核酸这些生物大分子氧化损伤的证据，提示氧化应激是疾病 进程中的一个重要方面，但是机体自身的抗氧化系统是否在 疾病的进展过程中起到了保护作用，是否随疾病的进展发挥 更高的保护作用，我们不清楚。目前文献报道Nrf2／ARE信 号通路的激活可在多种组织中诱导一系列内源性的细胞保 护基因上调，其中包括抗氧化酶、抗氧化蛋白、抗炎和解毒 的蛋白，它们的活化可以对机体起到保护作用。本试验目的： 中文摘要 差异，了解不同时期机体抗氧化能力的变化情况，也为深入研 究转基因小鼠中Nrf2／ARE通路提供前期基础。 方法： l、转基因鼠的繁殖 所有动物均饲养在恒温(25．27。C)、恒湿和无菌条件的 (Specificpathogen Gur转基 粒型鼠类饲料。为维持B6SJL．TgN(SODlG93A)l SODl 因小鼠突变基因稳定下传，将B6SJLG93A／+半合子雄 鼠与B6SJLFl／J半合子雌鼠交配繁殖．子代鼠经基因鉴定确 定是否带有人突变的基因 2、实验分组 研究对象共分为三个时期：症状前期(80天)、症状早期 及同窝野生型小鼠外，还选取一组同龄hSODl小鼠作对照， 为排除小鼠脊髓中人超氧化物岐化酶表达增多对实验结果 的干扰。 3、Nrf-2蛋白水平的测定 提取脊髓组织的浆蛋白，用Synergy．HT多功能酶标仪 测量OD数值，可检测样本蛋白浓度，计算100蛋白上样量。 走SDS—PAGE电泳，100V4度转膜2小时、5％脱脂奶粉 次；荧光二抗孵育，室温，2h；TPBS震荡漂洗5min×5次； Infrared Odyssey System检测分析。 Imaging 4、HO．1、NQ01基因表达水平的测定 酶标仪测量OD26do Infrared System检测 Odyssey Imaging 中文摘要 分析。D280比值，可检测RNA的纯度和含量，选用 胶成像系统拍摄打印实验结果，用凝胶图像分析系统分析结 果。 结果：与两组对照组相比，转基因小鼠在发病前期脊髓中 变化；症状期、终末期转基因小鼠脊髓中Nrf-2蛋白水平下 降及抗氧化酶HO一1、NQ01基因表达明显升高。 结论：本实验在肌萎缩侧索硬化转基因小鼠模型的基础 上，发现疾病症状早期和终末期存在着Nrf-2激活及下游抗 氧化酶基因表达上调的现象。但这些酶的含量很低，对机体 的保护作用还需进一步研究。 关键词：肌萎缩侧索硬化；氧化应激；Nrf-2；抗氧化反 英文摘要 The ofNrf2／ARE inALS Study PathwayTransgenic Mouse Model ABSTRACT DRfoundthat