基因表达要点.ppt

* 中山大学药学院 张革 * 制备siRNA5种不同方法的比较 * 中山大学药学院 张革 * 常用的病毒载体的特点： * 中山大学药学院 张革 * 病毒载体包装系统 组成：1、宿主细胞 2、辅助元件（辅助质粒、辅助病毒） 3、被包装的DNA/RNA 包含顺式作用元件 单因素生产系统（one-component system) 双因素生产系统 (two-component system) gag pol env LTR LTR ? 图1 反转录病毒包装系统示意图 图2 腺病毒包装系统示意图 293 cell E1a,b JM17 Ad Shuttle 293 cell E1a,b * 中山大学药学院 张革 * 多因素生产系统 (multi-component system) 多因素系统 双因素系统 图3 腺病毒伴随病毒包装系统示意图 host cell Helper virus Helper plasmid rep cap Vector plasmid Host cell +vector DNA Helper virus +helper plasmid 图4 双因素系统生产重组AAV病毒示意图 proviral cell Recombinant helper virus (rHSV-repcap) rep cap * 中山大学药学院 张革 * 无病毒基因的病毒载体 被包装的DNA/RNA中不含任何病毒编码基因，只保留其复制和 包装所必需的顺式作用元件。获得的重组病毒颗粒具有野生型病 毒的外壳/外膜和感染性，但不表达病毒蛋白。 腺伴随病毒载体： 反转录病毒载体： 腺病毒载体： 单纯疱疹病毒载体： LTR LTR ? gene gene ITR ITR pA gene ITR ITR pA gene pac ori gene gene gene gene * 中山大学药学院 张革 * 无辅助病毒包装系统 图5 重组AAV无辅毒包装系统 adenovirus gene ITR ITR aav vector plasmid E2a E4orf6 VA Helper plasmid: 293细胞 E1a,b cre 293-cre gene ITR ITR Adenovirus with packaging signal flanked by loxP 图6 mini-adnovirus无辅毒包装系统 * 中山大学药学院 张革 * 可调控表达的病毒载体 细胞的调控元件 病毒的调控元件 人工合成的调控元件 细胞特异性转录 细胞启动子 病毒启动子 albumin MVM P4 Tyrosinase or TRP-1 B19 promoter PSA HBV MBP JCV MCK EBV GFAP NSE KDR/flt-1 AFP CEA erbB2 HRE MDR1 P1 tTA tetOp gene P1 tTA tetOp gene tTA tetOp gene tetOp 四环素调控 合成的转录因子 GAL4 PR VP16 RXR EcR VP16 FKB12 ZFHD-1 FRAP P65 rapamycin RU486 GAL4 ER VP16 ESTRADIOL GAL4 ER p65 Diphenol indene muristerone 依赖于四环素和类固醇激素的调节系统是目前应用最广的调节系统 * 中山大学药学院 张革 * Adenoviral vectors Non-enveloped ds DNA, 36 kb Early proteins (E1A, E1B, E2,E3 and E4), late proteins (L1-L5) Causes a benign respiratory infections in human Serotypes 2 and 5 are commonly used as vectors Adenoviruses are often used as a vector in gene therapy research but they do not have the capaci