构建含CpG免刺激序列的DNA防龋疫苗.pdfVIP

作者：杨小青 构建含CpG免疫刺激序列的DNA防龋疫苗 研究生 杨小青 专业 口腔内科学 导师 杨丕山 中文摘要 目的：恢形链球菌是龋病的主要病原菌，该菌对牙面的 蔗糖依赖性和非依赖性粘附是变形链球菌致龋的两个主要机 制。非蔗糖依赖性粘附机制是指变形链球菌表面蛋白抗原HI {AgI／II)与牙面上来自唾液的获得性膜的直接结合作用。Ag I／II上的唾液结合区段fSBR、，被认为是与牙面唾液蛋白受 体结合的活性部位，SBR在变形链球菌致病过程中的重要作 用使其成为防治龋病的主要研究对象。然而，这种单纯地接 种来自变形链球菌的抗原物质所引起的免疫反应相对较弱． 特异抗体效价较低。选择强的免疫佐剂，增强机体对一些免 爱原性较弱的抗原的反应，是制备具有实用价值的疫苗的重 要要求。在DNA疫苗的氨苄青霉素抗性基因中有一个以CpG DNA片段是一种强烈的非特异性免疫 Sequence)，这种CpG 注剂。厂本研究的目的是构建含CpG免疫刺激序列针对变形链 竦菌SBR的DNA防龋疫苗． f方法：l。计算机检索原核表达质粒pSBR—CT．～B基因 的特异性PCR引物。 的DNA片段SBR和SBR．CTB。 型垒壁壁主坚 一————堕坠堡塑L 3．通过TA克隆技术将目的DNA片段克隆于载体 pMDl8．T上。 4．限制性内切酶酶切鉴定目的DNA片段插入方向。 5．选择插入方向正确的克隆，将目的DNA从载体上释 放。将目的DNA片段充隆于台有CpG免疫刺激序列的真核 表达载奉pcDNA3．1。 结果：成功构建了阅度框架正确的真核表达质粒 疫效粟TT了竖实基础， 结论：通过限削性内叨酶酶切方法和基因测序等方法对 所构建的重组质粒进行鉴定，结果都证明所构建的重组质粒 与没计完全相符。 关键词：唾液结合区段Cpa序列DNA疫苗龋镉 ．当堡查兰婴主丝苎 堡童!塑：!!塑 CONSTRUCTION OFANTI．CARIES DNAVACCINE CONTAINING CpGSEQUENCES Graduate YangXiaoqing Tutor Pishan Yang SpecialityOralMedicine Abstraet mutans isthechief of 0bjective：Streptococcuspathogen human caries． and Sucrose—depedent adherencetwo are mainmechanismsofS on mutans’locating tooth surface．Surlhce ofS．mumnsiSconsideredto protein