第一章蛋白质化学1-氨基酸要点.ppt

蛋白质是分子量很大的生物分子 1．均一的蛋白质 它的所有分子在AA的组成和顺序以及肽链的长度方面是相同的 2．寡聚蛋白质 某些蛋白质是由两个或更多个蛋白质亚基（多肽链）通过非共价结合而成的。 特点：a.可解离成亚基，但相当稳定；b.可以结晶的形式从组织中分离；c. 有此蛋白质以寡聚蛋白质表现其活性的。 3． 简单蛋白质AA残基数目的估算。 AA残基的数目＝蛋白分子量/110 因为，AA残基的平均分子量＝128－18＝110。 从上图可知：氨基酸在酸性环境中，主要以阳离子的形式存在，在碱性环境中，主要以阴离子的形式存在。在某一pH环境下，以两性离子（兼性离子）的形式存在。该pH称为该氨基酸的等电点。所以氨基酸的等电点可以定义为：氨基酸所带正负电荷相等时的溶液pH。 氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被碱滴定，应该具有两性电离的性质，现以甘氨酸为例来说明氨基酸两性电离的特点。 左图是甘氨酸的电离酸碱滴定曲线，从左向右是用NaOH滴定的曲线，溶液的pH由小到大逐渐升高；从右向左是用盐酸滴定的曲线，溶液的pH由大到小逐渐降低。曲线中从左向右第一个拐点是氨基酸羧基解离50%的状态，第二个拐点是氨基酸的等电点，第三个拐点是氨基酸氨基解离50%的状态。 通过氨基酸的滴定曲线，可用下列 Henderson-Hasselbalch 方程求出各解离基团的解离常数（pK’）： 根据pK’可求出氨基酸的等电点，可由其等电点左右两个pK，值的算术平均值求出。 中性氨基酸： pI=(pK’1 + pK’2)/2 pK’1为α-羧基的解 离常数, pK’2为α-氨基的解 离常数。 氨基酸等电点的计算 二十种氨基酸的pK，及等电点： 2.由α-氨基参加的反应： (1) 与亚硝酸反应：放出氮气，氮气的一半来自氨基氮，一半来自亚硝酸，在通常情况下测定生成的氮气的体积量可计算氨基酸的量，此反应可用于测定蛋白质的水解程度。 (2) 与甲醛的反应：用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离出氢离子，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接滴定法。 (3) 与2,4-二硝基氟苯（2,4-DNFB）的反应（Sanger反应）： 生成黄色的二硝基苯-氨基酸衍生物。 Sanger反应 在弱碱溶液中，氨基酸的α-氨基与2,4-二硝基氟苯(DNFB) 反应，生成黄色的二硝基苯氨基酸（DNP-AA） DNFB ＋ O2N NO2 F H2N CH COOH R DNP - 氨基酸 O2N NO2 HN CH COOH R ＋ HF 此反应最初被Sanger 用于测定肽链 N-端氨基酸 (4) 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman反应）：生成苯乙内酰硫脲-氨基酸。 Edman反应 N C S ＋ 40℃，弱碱 N C NH R CH C O S 40℃， H+ 、硝基甲烷 COOH H2N CH R PITC 异硫氰酸苯酯 PTC- 氨基酸 苯氨基硫甲酰氨基酸 PTH- 氨基酸 苯硫乙内酰脲氨基酸 H N C NH R CH C O OH S 可用层析法鉴定出aa的种类 (5) 与丹磺酰氯（DNS-Cl）的反应：生成荧光物质DNS-氨基酸。 (6) 成西佛碱反应：与醛类化合物形成弱碱 (7) 脱氨基反应：酶催化形成酮酸 （3）、(4)、(5)反应用于蛋白质的N-末端的测定。 * 主讲教师：　季祥　 jixiang@imust.cn 　 【目的与要求】 §1.1 蛋白质通论 §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 1.了解蛋白质对生物体的重要意义。 2.了解蛋白质的分类，掌握蛋白质元素组成的 特点。 3.掌握蛋白质的基本构成单体：氨基酸的结构 特点，从各氨基酸的结构特点上理解氨基酸 的分类。 4.掌握氨基酸的理化性质，重点掌握两性电离 与等电点含义、茚三酮反应及其应用。 〔目的与要求〕 5.掌握蛋白质一级结构的概念；了解蛋白质一 级结构的测定方法与思路，学会分析简单多 肽的氨基酸顺序。 6.理解并掌握蛋白质二级结构的概念；二级结 构的基本类型：α-螺旋及β-折叠的结构 特点；了解几种常见纤维状蛋白质的结构特 性；了解超二级结构及结构域的概念。 7.了解蛋白质三级结构、四级结构的概念及稳 定因素。 8.充分理解蛋白质结构与功能的关系；从核糖 核酸酶的变性与复性实验理解一级结构与空 间结构的关系；以细胞色素C等为例充分理解 一级结构与蛋白质生物学功能的关系；从血 红蛋白与肌红蛋白的结构特性理解蛋白质空 间结构与生物学功能的关系。 9.掌握蛋白质的理化性质：胶体性质、两性电 离与等电点、沉淀作用、变性作用以及这