小鼠腮弓胚层分的方法学比较研究.pdfVIP

Y 653996 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致it的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学 位或证书而使月过的材料。与我一同工作的同志对工研究所做的任何贡献均已在 论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签“:#4彭},isq:日期、介月‘伸“ 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解四川大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。 本人授权四川大学可以将学位论文的全部或部分内容编人有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签名 : 签字日期卿行夕 签字日争少乒介冷 学位论文作者些业后云向 工作单位 : ltt2Jq7哪I 通讯地址 :懊川礴详位姆‘则炎病反 15:Pov}-/ 四川大学华西口腔医学硕士专业学位论文 小鼠腮弓胚层分离的方法学比较研究 七年制研究生 彭 品 导 师 田卫东 中 文 摘 要 本实验旨在对分离小鼠腮弓外、中胚层的三种方法进行研究和比较，找 出针对不同的实验目的，其最合适的分离方法及其过程，并且对分离的效果 进行组织学特殊染色和SEM观测以验证其效果。 本实验以9-30体节时期的小鼠腮弓为实验对象，采用三种方法:方法一 为1omm的EDTA(约相当于含0.37224%的乙二胺四乙酸二钠)的PBS溶液 调定PH值为7.0,孵育分离腮弓;方法二为。.25%胰蛋白酶的D-hanks溶 液调定PH值为7.0,孵育分离腮弓;方法三为0.125%胰蛋白酶和0.005%的 乙二胺四乙酸二钠(约相当于含0.13mM的EDTA)的D-hanks溶液调定PH 值为7.0,孵育分离腮弓。 分别在室温200C，设定5-7,7^-9,9-11,11一13,13一15,15一17, 17^-19分钟共七个时间段，每个时间段使用三种方法各分离一个胚胎。确定 分离的最早最佳时间及分离的操作细节和操作方法。之后，在所获得的最佳 分离时间上，获得分离的上皮与上皮下组织，并采用组织病理学切片 (HE 染色十PAS特殊染色)及扫描电子显微镜的双重方法观测分离效果。 第一种分离液，在8-10分钟20℃的孵育下，成功的将上皮从基底膜上 分离下来。方法一可以用于为了获取9-30体节时期的小鼠第一腮弓或上下领 突不含外胚间充质组织或细胞的外胚上皮。 第二种分离液，在13-15分钟20℃的孵育下，可以将上皮带基底膜和 基底膜下少量的外培间充质一同分离下来。分离的层次在外胚间充质内，但 是接近基底膜。由于操作相对困难，方法二不推荐使用。 第三种分离液，在5-7分钟20℃的孵育下，将上皮连同基底膜和较大量 的外胚间充质一同分离下来，所带的间充质比较均匀。方法三可以用于为了 获得 9-30体节时期的小鼠第一腮弓或上下领突的不含外胚上皮的组织或细 胞的外胚间充质。 关键词:体节，腮弓，胚胎学，方法学 四川大学华西口腔医学硕士专业学位论文 Thecomparativestudyonthemethodologyofseparatingthe epitheliallayerinmicebronchialarch Seven-y