葡萄籽原花青素取物预防龋病的实验研究.pdf

勿 沁 分 次萝 口腔 做术压学硕去学少论 丈 葡萄籽 原花青 素提取物预 防龋病 的实验研 究* 硕 士研 究生 毕 玲 导 师 傅柏平 中文摘 要 目的 : 研 究葡萄籽 原花青素提取物 (G SPE ) 对变形链球 菌生长 、产酸及 防龋 作 用 ，探 讨 防龋机制 。 方法 : 实验 一 : 选用 国际标准菌株 ，变形链球 菌族 (以下简称变链 菌 ) 的变 形链 球 菌 (5.m utan s higbritt，血清 型e) 和 远 缘链 球 菌 (5 .Sobrinu s 67 15 ，血 清 型g )， 在含 1% 蔗糖 的胰 蛋 白酶消化 大豆 液体培养基 (T sB ) 中厌氧 培养 (C0 280% ，N21o%， H210% )，采用液体/琼脂稀释 法 体外抑 菌试验 分别测 定葡 萄籽 原花青 素提 取物 (G SPE ) 和茶 多酚 (仰 ) 对两种变链菌 的最低抑菌浓度 (M IC ) 和最低 杀菌浓 度 (M B C )。通过测 定MIC值 以下4个浓度梯度培养前后PH 值 的变化 ，并 以不加 药 的培养液为对 照 ，进一步观 察G SPE 对变形链球菌产酸 能力 的影 响 。变链 菌在 浓 度 为 1/2 MI C 的GS PE 的T SB 中培 养 24 h ，离 心得 菌体 ，以生 理 盐水洗 3次 ，离 心 ， 用 2 % (v/v) pH 7.4 的戊 二醛 固定液 固定 ，4 ℃保 存 ，10 m 咖 l四氧 化 饿 后 固定 ， 室温 保存 l d ，醋 酸铀 染色后 经 一 系 列不 同浓度 的酒精逐 级脱 水 ，环 氧树 脂 包 埋 ， 超 薄 切 片 ，构椽 酸铅 染 色 ，透 射 电镜 下观 察G sPE 作用 后5.mu tan s 工ngbr itt 和 S ·Sobr inu s 67 15 的形态 学变 化 。 实验 二 : 选 择Zl d 鼠龄 断乳 SP rague一D aw by (sD ) 大 鼠24 只 ，随机 分成3组 ， 每 组 8 只 ，雌 雄 各 半 ，分 别 为葡 萄籽 原花 青 素 提 取物 (GSPE) 溶 液 、茶 多酚 (TP) * 资助基金 : 浙江 省 中医药 管理 局 资助项 目(项 目编 号G 励 沁 分 次掌 嗜 麻 压学硕去和 叔 溶液 、蒸馏 水 (H20) 组 。2 1~ 23 d 鼠龄 期 间给予古有广谱抗生素 (2 kg饲料 加氨 节 青霉 素 、氯霉素各 1 9) 的致龋饲料200 0 # ，其它 时间的饲料 中不加抗 生素 。在 鼠龄 24一zs d期 间，连续s d于 口腔 内接种变 形链球菌5.sobr inu s 6715 (10，一6 C FU /m l)，每 次接种 100 ul。 自29 d起 各 组分 别用M IC浓度 的GSPE溶液4 m g/m l、 TP 溶 液2 m g/ml 、蒸馏 水 处理 。大 鼠取仰 卧位 ，将O.3 ml药物 用 钝 针 头注 射 器 注 于大 鼠牙面 及 口腔 ，维持 15 5 ，每 天处理 l次 ，处理后30 min 内禁饮食 。连 续 处 理60 d后处死大 鼠，采 用KeyeS龋 齿评 分法观 察 、评估大 鼠磨牙牙合面 窝沟 患龋 情况 ，采用SPSS 13.0统计软件进行单 因素方差分析和均数两两 比较 ，总结GS PE 对 SPr ague一Daw ley大 鼠磨牙牙合面 窝沟龋 的预 防效果 。 结 果 : 实验一 : ①G SPE 对5.mu tans Ingbr itt和5.Sobr inuS 6715 的M IC均 为 4.OOm g/m l ，MBC均 为8.00 mg/m l ; TP对 5.mu tan s Ingbr itt和 5.Sobr inu s 67 15 的M IC均为2.00 mg/m l，MBC均为4.00 mg/m l。②产酸抑制实验 中M IC值 以下4个 浓度 的前三个浓度 (2.0