实验一引言和实验室基础技术—分析.ppt

现代植物学研究技术 实验分组：周一至周五（五组）、人员固定、位置固定。 内容：共12个实验，内容涉及植物学（组织切片、组培）、植物生理学（光合、营养、激素、逆境等）、细胞生物学，由多名教师执教。 考核：平时表现（务必本人签名）+实验报告（务必写清组别、单独记分）。 实验一 实验室基础技术 一、实验目的： 以加强植物科学研究基本功的训练 培养科学研究的良好作风 二、实验内容： 掌握植物科学常规精密仪器的操作方法 一般的生物数据统计及图表制作技术 具体实验内容 （一）电子显示天平的使用 （二）可见分光光度计的使用 （三）加液的重现性（或精密度）和准确度 检验 （四）pH计的使用 （五）紫外分光光度计的使用 （六）科研论文中规范图表制作的一般要求 （一）电子显示天平的使用 使用规则 ： （1）天平在使用前应调节底座螺丝使其保持水平，并不要随便移动天平。 （2）看清天平的最大称量，对待称物品最好先粗称，使其重量不要超过最大称量，以免损坏天平。 （3）根据称量要求选择合适天平。如要称量植株幼苗的鲜重，选用感量为0.0001克的电子天平，因材料不断蒸发，很难称准，应选感量大的，如感量为 0.01克的电子天平；而制作标准曲线要称取标准药品时则应选取感量较小的，如感量为0.0001或感量为0.001克的电子天平。 实验规范训练－量程的选择 天平 烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶－－不同规格 具体内容： （1）顶部装载式（Sartorius MP8型）感量0.01克，最大称量1600克。随机选取生长一致的小麦苗4(?)株，洗净，吸去附着水分，分别称重，计算单株平均重和标准差（X?SD） （结论？）。 （2） Sartorius-GMDH: 感量0.0001克，最大称量160克。准确称取一定量（0.6585g??）的铁氰化钾, 配制100ml 0.02mol/L 铁氰化钾溶液（铁氰化钾的Mw=329.25）。 （二）可见分光光度计的使用 使用方法： （1）使用本仪器前，使用者应首先了解本仪器的基本结构和工作原理以及各操作旋钮的功能，在未接通电源之前，应检查电源线接线是否牢固，通地是否良好，各旋钮的位置是否正确，同时检查仪器底部的放大器和单色器的二个矽胶干燥筒，如受潮变色，应更换干燥的蓝色矽胶或倒出原矽胶，烘干后再用。 （2）在仪器尚未接通电源前，电表的指针必须位于“0”刻线上。 （3）将仪器的电源开关接通，打开比色皿暗厢盖。选择需用的单色光波长，调节“0”电位器使电表指“0”，然后将比色皿暗厢盖合上，比色皿处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节“100%”电位器使电表指针到满刻度附近，仪器预热20分钟左右。 （4）放大器灵敏度有5档，是逐步增加的，“1”最低，其选择原则是保证能使空白档良好调到“100%”的情况下尽可能采用灵敏度较低档，这样仪器有更高的稳定性。所以，使用时一般置“1”档。灵敏度不够时再逐级升高，但改灵敏度后须按（3）重新调“0”和“100%”。 （5）预热后，按（3）连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。 实验内容 （1）以水为对照，取1ml 0.02 mol/L铁氰化钾溶液于100ml容量瓶中，定容至100ml。 （2）用9100型分光光度计测定该铁氰化钾溶液的吸收光谱，波长在420nm，记录结果。 （三）加液的精密度（或重现性）和准确度检验 实验原理： 在定量测定试验中，误差是绝对存在的。它包括系统误差和偶然误差，前者是由于取材误差、仪器误差、试剂误差、操作误差等一些经常性的原因所引起，它直接影响实验结果的准确度；后者则是由于一些偶然的外因所造成，它影响实验结果的精密度（或重现性）。 准确度是指测量值与真实值符合的程度，它一般用误差来表示； 精密度是指几次重复测定结果之间符合的程度，显示其重现性程度，它用偏差来表示。 因此必须善于利用生物统计学的有关原理和方法进行统计分析，以分析和判断实验结果的可靠性和正确性。实验中，每种处理至少要设三次重复，定量测定数据也要有三次重复，否则无法进行统计分析。 补充资料 精密度（precision）和准确度（accuracy）不一样，回收率（recovery）与准确度也不一样。 以前曾经有把准确度叫做相对回收率的这种提法，但是现在准确度和回收率是分开算的。 精密度通常包括批（batch）内和批间，主要是指重复处理样品测定的重现性，以RSD考察。 （若确要区分二者：精密度通常指批（batch）内，重现性通常指批间的，都要求5次以上的重复，以RSD考察） 准确度是加标样品通过标准曲线回算的浓度与实际加标量的偏差来考察。 回收率是以加标样品与同浓度的标准品的响应信号（response，即峰面积）的比值来考察。 简单的统计学计算公