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TEF-1 δ表达改变作为新的镉暴露特异标志物的体内研究 广州医学院硕士论文 TEF-1δ表达改变作为新的镉暴露特异 标志物的体内研究 硕士研究生：卢茜 导 师: 雷毅雄 教授 中文摘要 1. 目的 镉(Cadmium，Cd)及其化合物是一类工业毒物和环境污染物，并在职业和环 境中长期存在。镉又是一种生物半减期很长（19～30 年）的多器官、多系统毒 物，如肾损伤、肝损伤、呼吸系统疾病、神经系统障碍、骨骼系统损害，甚至导 致多种癌症的发生等。根据国际癌症研究组织(IARC) 的报告，镉及其相关化合物 是确认的第一类致癌物，是人类危害最大的金属毒物之一。因此，镉暴露及其健 康损害，特别是镉低水平长期毒作用已经成为毒理学研究的热点，其中探讨镉暴 露特异标志物和相关疾病，是预防和早期诊治之根本。近年来，翻译延伸因子 1δ （the mouse translation elongation factor-1δ，TEF-1δ）被鉴定为一个新的镉应答 原癌基因。但是，TEF-1δ基因是否可作为潜在的镉暴露生物标志物尚未见报道。 本实验通过创建大鼠慢性镉暴露模型，对血中TEF-1δ 的表达改变作为新的镉暴 露生物标志物进行研究。 2. 方法 2.1 通过预实验找出CdCl2 染毒SD 大鼠100％和0 ％死亡的剂量范围，求出 正式实验的剂量比，以此等比级差设6 个剂量实验组和1 个对照组，每组8 只大 鼠，观察大鼠CdCl2 急性中毒情况，采用改良寇氏法测定CdCl2 溶液腹腔注射对 大鼠的LD50 。 2.2 用SPF 级别SD 大鼠96 只按体重随机分4 组，3 个CdCl2 实验组（高剂 3 TEF-1 δ表达改变作为新的镉暴露特异标志物的体内研究 广州医学院硕士论文 量1.225mg/kg、中剂量0.612mg/kg 和低剂量0.306mg/kg, ）和1 个生理盐水对照 组（0.9% NaCl ），每组24 只大鼠，雌雄各半，腹腔注射，每周染毒5 次，连续 14 周。之后所有的大鼠均置于代谢笼中收集24 小时尿液，然后剖杀收集血液和 内脏器官。 2.3 内脏器官包括肝、肾、心和肺，计算脏器系数并且做病理切片以观察组 织形态学变化。测定血清丙氨酸转氨酶（ALT ）和谷草转氨酶（AST ）作为肝功 能生化指标，测定血中尿素氮（BUN ）、血肌酐（SCR ）、尿肌酐（CR ）以及 24 小时尿蛋白(24hPro)作为肾功能生化指标。 2.4 血液、尿液和器官组织用原子分光光度计测定其镉的含量。血白细胞和 器官组织分别提取总RNA ，再用逆转录PCR（RT-PCR ）和荧光定量PCR(FQ-PCR) 法分析其TEF-1δ因子的表达水平。最后，对血中TEF-1δ因子表达水平与血镉、 尿镉、肝镉、肾镉、心镉、肺镉含量和肝肾功能变化以及各器官组织的 TEF-1δ 因子表达水平之间分别作相关性分析。 3. 结果 3.1 急性染毒试验的结果显示，实验大鼠绝对致死量为26.00 mg/kg ，最大耐 受剂量为 11.54 mg/kg，实验剂量组依次为 26.00 、22.10 、18.79、15.97、13.57 和11.54 mg/kg。镉中毒大鼠一般在8 小时内死亡，少数在72 小时内死亡；CdCl2 溶液腹腔注射对大鼠的 LD50 为 18.37 mg/kg，95 ％的可信区间是 16.56～20.38 mg/kg 。 3.2 大鼠经过不同镉浓度慢性染毒14 周后，不同镉暴露的大鼠血、尿和肝、 肾、心及肺脏器中的镉含量均有不同程度升高，并随着镉的暴露水平的增加而升 高，存在明显的剂量依赖关系(P0.01) 。实验组大鼠肝、肾、心、肺组织的脏器 系数均有不同程度升高，并随着镉的暴露水平的增加而升高，具有明显的剂量依 赖关系(P0.05) 。实验组大鼠肝、肾、心、肺组织的的病理切片中与对照组相比 较均观察到病理学改变。镉染毒的大鼠中肝功能生化指