抑癌基因甲基化抑癌基因和DNA甲基化酶表达水平与燃煤型砷中毒关系的研究.pdf

抑癌基因甲基化及抑癌基因和DNA甲基化酶 表达水平与燃煤型砷中毒关系的研究 中文摘要 目的 流行病学研究证明，由于环境、职业和治疗性原因使人类长期暴露于砷及其 化合物，皮肤、膀胱及呼吸系统等部位的肿瘤发病率明显增高。燃煤型砷中毒是 由于长期使用砷含量高于lOOmg／kg的煤，高砷煤释放出大量的砷污染粮食、辣 椒和室内空气，通过饮食与呼吸大量的砷蓄积体内，而造成的慢性砷中毒。贵州 省燃煤型砷中毒自发现至今已20多年，在当地造成严重危害，尤其是其高发的 远期致癌效应严重地威胁着病区人群的生命安全。因受限于动物模型难以复制成 功和砷的毒性作用机制尤其是分子机制不清，关于砷的致癌机理目前还不是很明 确。随着表观遗传学在肿瘤研究中的逐步深入，认为DNA启动子区域的高甲基化 是抑癌基因失活的主要机制之一，启动子异常甲基化是肿瘤形成过程中的一个早 期、频发事件，与肿瘤的发生、发展及预后关系密切。目前研究表明，无机砷在 人体内的甲基化代谢过程可能影响DNA甲基化，导致DNA甲基化异常，砷对DNA 甲基化的影响与砷致癌作用的关系受到越来越多的关注。目前大多数相关研究为 动物或体外试验，人群研究资料较少。本研究在现场流行病学调查的基础上，通 过检测燃煤型砷中毒病人外周白细胞抑癌基因p16、p15、RASSFlA启动区的甲 基化，并对抑癌基因和DNA甲基化酶(DNMT)的表达水平进行研究，探讨燃煤型 砷中毒对抑癌基因甲基化及抑癌基因和DNA甲基化酶表达水平的影响，为进一步 研究砷致癌的分子机制提供依据。 方法 1 应用现场流行病学调查方法，对贵州燃煤型砷中毒病区的病人、病区对照和 病区外对照进行流行病学调查。 2运用甲基化特异性PCR方法(Methylation—specificPCR，MSP)，检测外周 2 白细胞抑癌基因p16、p15、RASSFlA启动区的甲基化状况，分析影响抑癌基 因甲基化的相关因素。 录水平，分析影响抑癌基因转录水平的影响因素。 平，分析影响DNMT转录水平的影响因素。 结果 第一部分燃煤型砷中毒对抑癌基因甲基化的影响 l 抑癌基因p16、p15、RASSFlA启动区的甲基化率病例组显著高于内、外对 照组，并呈现随砷中毒病情增加的趋势(P0．01)。 2经对性别、年龄、民族、居住年限、文化程度、吸烟、饮酒等进行的单因素 分析表明其不是影响抑癌基因p16、p15甲基化的因素；而年龄是影响RASSFlA 基因甲基化的因素，RASSFlA基因甲基化人群与非甲基化人群平均年龄比较 有显著性差异，甲基化人群平均年龄显著大于非甲基化人群(P0．05)。 3 因甲基化的主要影响因素是砷中毒程度和年龄，其标准回归系数(b’)分别为 加，RASSFlA甲基化率增加。 第二部分燃煤型砷中毒对抑癌基因表达水平的影响 1抑癌基因p16和RASSFlA的转录水平外对照组、内对照组、砷中毒轻度、中 度、重度中毒组之间总体有显著性差异(PO．05)，随砷中毒程度加深，抑癌 基因p16和RASSFlA的转录水平降低；抑癌基因m5的转录水平总体无显著 性差异(P0．05)。 2经对性别、民族、居住年限、文化程度、吸烟、饮酒等进行的单因素分析表 3 转录水平无相关关系(P0．05)：年龄与p15转录水平呈正相关关系，随年龄 随年龄增大RASSFlA转录水平降低(PO．01)。 3 多元线性回归分析结果显示，p16转录水平的主要影响因素是砷中毒程度和 和0．050，随着砷中毒程度加深，p16转录水平显著降低；而文化程度高的研 究对象其p16转录水平更高，说明文化程度对砷中毒引起的p16转录水平降 低可能是一个保护因素；犀5转录水平的主要影响因素是年龄，其标准回归 高；RASSFlA基因转录水平的主要影响因素是砷中毒程度和年龄，其标准回 程度加深和年龄增大，RASSFlA转录水平显著降低。 第三部分燃煤型砷中毒对DNMT表达水平的影响 1 DNMTl和DNMT3B的转录水平外对照组、内对照组、砷中毒轻度、中度、重度 的转录水平显著升高；DNMT3A的转录水平总体无显著性差异(PO．05)。 2经对性别、年龄、民族、居住年限、文化程度、吸烟、饮酒等进行的单因素 平显