槲皮素通便功能制研究及松针槲皮素提取工艺的优化研究.pdfVIP

3.1 使用平板计数法测定小鼠结肠内容物和粪便中肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳酸菌的含 量。 3.2 测定小鼠血清中乳酸的含量。 3.3 测定小鼠结肠内容物的pH 值 3.4 测定小鼠结肠TNF- α、IL-6、EGF 的mRNA 的表达 4 松针中槲皮素的优化提取和分离 4.1 松针芦丁的优化提取 使用响应面法中的中心复合设计优化提取松针中芦丁的工艺参数，用硝酸铝-亚硝酸钠 比色法检测芦丁提取液的含量。 4.2 粗槲皮素的制备 按优化的提取工艺条件，得到芦丁提取液，然后浓缩至无醇味，加浓盐酸调节pH ，置 冷柜过夜使晶体析出，离心，去上清。沉淀放置在干燥箱60℃下干燥约12 小时，粗槲皮素。 4.3 精槲皮素的制备 取粗槲皮素，加2%H SO 溶液直火加热至微沸，析出鲜黄色沉淀。冷却，离心，去上 2 4 清，将沉淀水洗成中性。沉淀干燥，得精槲皮素。 4.4 定性分析 4.4.1 三氯化铁试验检测样本的酚类化合物。 4.4.2 盐酸-镁粉试验检测样本的黄酮成分。 4.4.3 Molish 反应试验检测样本的糖类物质。 4.5 高效液相色谱法（HPLC ）定量分析 使用HPLC 法对粗槲皮素和精槲皮素两样本中的芦丁与槲皮素进行定性定量分析。 4.5 方法学考察 通过重复性实验、精密度实验、稳定性实验检验仪器、样品和实验方法。 结果 1 小鼠慢性传输性便秘模型的建立 1.1 小鼠排便情况评价 复方地芬诺酯能够明显延长小鼠首次排黑便用时、减少小鼠 6h 内总排便重量和粒数 （P0.05 ），符合STC 的特点。 1.3 制作小鼠结肠组织病理切片，观察小鼠结肠病理切片变化。 STC能导致小鼠结肠绒毛减少，肠壁变薄，腺体腔变窄，腺体萎缩。 2 槲皮素通便功能的评价 2.1 槲皮素能够明显缩短小鼠首次排黑便用时、增加小鼠6h 内总排便重量和粒数（P0.05 ） 说明槲皮素有通便效果。 2.2 槲皮素能够明显降低小鼠血清中丙二醛（MDA ）的含量（P0.05 ）。 2.3 各组小鼠结肠组织病理变化，松针剂量组结肠较为正常，且结肠绒毛、消化细胞及腺体 与模型组比较增多。 3 槲皮素对肠道菌群的影响 3.1 与便秘组比较，灌服100mg/kg 和400mg/kg 的槲皮素能明显增加小鼠肠道内乳酸杆菌菌 落数（P0.05 ），能够显著减少肠球菌的菌落数（P0.05 ）。 3.2 槲皮素对肠道菌群的影响。 灌服100-400mg/kg 槲皮素能够明显增加小鼠血清中乳酸的含量（P0.05 ）。 3.3 各测定小鼠结肠内容物的pH 值 各剂量组均能明显降低结肠内容物的pH 值 （P0.05 ）。 万方数据 3.4 测定小鼠结肠TNF- α、IL-6、EGF 的mRNA 的表达 各剂量组均能明显降低结肠的TNF- α的mRNA 的表达（P0.05 ），剂量1、3、4 组能 明显降低结肠的IL-6 的mRNA 的表达（P0.05 ），剂量4 组能明显提高EGF 的mRNA 的 表达（P0.05 ）。 4 松针中槲皮素的优化提取和分离 4.1 松针芦丁的优化提取 得到松针中芦丁的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度为 30%，料液比为 1:50 （g ：ml ）， 提取温度为65℃，提取时间为120min。松针中芦丁提取率的预测值为10.28%。 4.2 定性分析 4.2.1 三氯化铁试验检测样本的酚类化合物。 芦丁提取液、粗槲皮素与精槲皮素溶液