猪囊尾蚴蛋白酶基因克隆.pdfVIP

猪囊尾蚴蛋白■的基因克隆 摘要 猪带绦虫是常见的人畜寄生虫之一，它对人畜的危害主要 由其幼虫猪囊尾蚴引起。为了从分子水平研究猪囊尾蚴的某种 蛋白酶的基因结构，进而了解其致病机理，再以克隆的基因制 备高纯度的蛋白，用于诊断和预防猪囊尾蚴病，本研究采用了 分子克隆的一系列方法。(实验中用异硫氰酸胍一步法提取猪囊 尾蚴总RNA，经反转录合成cDNA片段，并将其与载体Uni． ZAP XR连接构建猪囊尾蚴eDNA文库。以兔抗猪囊尾蚴多克 隆抗体的血清筛选eDNA文库，得到了两个阳性克隆(命名Ts。． SK质粒中， Ts。)．将两个阳性克隆分别亚克隆到pBluescript 以载体臂上的通用引物进行PCR；再以载体臂上cDNA插入 片段两侧酶切位点的相应限制性内切酶BamHI与KpnI进行限 制性酶切图谱分析，鉴定了插入物的特异性； 取纯化的Ts， PCR产物再次亚克隆入pUCl8质粒中，进行大片段DNA的 定向连续次级克隆．之后，用双脱氯末端终止法测定插入片段 的序列并在GenBank中进行核苷酸与氨基酸序列同源性检索， 使用GENETYX软件进行比较分析．／本研究从cDNA文库中 rRNA的基因。 片段。同源性分析表明Ts。片段是线粒体12S (GENETYX软件比较结果显示，TS。与多房棘球绦虫、牛带绦 浊、肥头绦虫、水泡绦虫的线粒体12SrRNA的同源性为 70．9％，与人、小鼠、大鼠的相应序列同源性为46．9％；TS，中 94．564bp的471个碱基为猪囊尾蚴线粒体NADH脱氢酶亚单 位1的编码区，编码长度为157个氨基酸残基的NADH脱氢 酶亚单位1．该编码区与多房棘球绦虫、牛带绦虫、多头绦虫、 羊绦虫4种寄生虫的NADHl基因序列的同源性为63．1％，与 人、小鼠、大鼠的相应序列同源性为31．6％；氨基酸序列的比 较结果分别为58．6％和23．8％。卜 关健词：猪囊尾蚴。分子克隆／。cDNA文库、PCR 亚克隆序列分析同源性分析 TheMolecularof Cellulosae CloningCysticercus ProteinaseGene Abstract Taen妇solium．onekindof of and human ordinaryparasite harmto its orderto livestock，does peoplemainlyby cysticercus．In the structureofsomekindsof of studygene proteinasecysticercus andmakecertainofits at cellulosae mechanism disease—causing molecular to and level，then diagnosis producehighquality