金属硫蛋白在乙致大鼠脑毒性中的作用研究.pdfVIP

华中科技大学同济医学院 硕士研究t论文 金属硫蛋白在乙醇致大鼠脑毒性中的作用研究 姓名：周义军 导师：曹玉广 摘 要 岛景：金属硫蛋白是一种应激蛋白，可被多种因素诱导表达。许多研究 、 证实，急性乙醇摄入可诱导金属硫蛋白表达增高，并存在性别差异。广7一 目的：本实验通过测定大脑、小脑、海马、肝、肾中金属硫蛋白及锌、 铜、钙的含量，以了解长期(3个月)乙醇摄入对不同组织中金属硫蛋 白基因表达和金属分布的影响，并探讨乙醇诱导金属硫蛋白基因表达的 机制；同时通过体外实验研究乙醇对神经胶质细胞存活率和抗氧化系统 的影响，以及金属硫蛋白和硒对乙醇细胞毒性的抑制效应，从而进一步 分析乙醇中毒的机理。 ／ f方法：体内实验，Wistar大鼠随机分为4个组，雌雄各半，分别给予0、 、 10％、30％、50％乙醇0．5ml进行灌胃染毒，每天一次连续3个月。染 毒后，经断头处死动物，分离大脑、小脑、海马、肝、肾，采用镉．血 红蛋白饱和法测定样品中金属硫蛋白含量，原子吸收火焰法测定样品中 锌、铜、钙含量。应用SAS软件对测定结果进行分析，比较这些组织 中金属硫蛋白及金属含量在不同剂量组、不同组织中的差异，以及金属 硫蛋白的变化与相应组织中金属的改变之间的关系。 体外实验，从新生(出生盾1天)大鼠大脑中分离神经胶质细胞， 华中科技大学同济医学院 硕士研究生论文 进行原代培养。对原代培养的神经胶质细胞进行乙醇染毒。细胞生存毒 性实验分为3个组：1．乙醇毒性组，乙醇染毒剂量浓度分别为o、0．05％、 o10％、O．20％：2乙醇加金属硫蛋白组，乙醇浓度为o．10％，金属硫蛋 白的剂量分别为o、50、IOO、2009mol／l：3．乙醇加硒组，乙醇浓度为 o．10％，硒浓度分别为o、1、2、3mg／l。在乙醇对细胞谷胱甘肽过氧化 物酶活性及丙二醛合成影响试验中，乙醇浓度为002％，金属硫蛋白和 硒的浓度不变。细胞存活率通过MTT试验进行测试，谷胱甘肽过氧化 物酶活性及细胞培养液中丙二醛含量用相应试剂盒进行测定。 结果：长期乙醇摄入后，大鼠大脑、小脑、海马中金属硫蛋白水平呈上 升趋势，且这种影响存在性别差异。雄性大鼠在30％乙醇剂量组中，大 脑、小脑、海马金属硫蛋白水平分别为对照组的1．38、1．56、1．28倍 雌性大鼠在30％7,醇剂量组中，金属硫蛋白表达增加的效应较显著，大 脑、小脑、海马中金属硫蛋白水平分别为对照组的1．39(P0．05)、 3．08(P0．05)、1．79(P0．05)倍。肝金属硫蛋白雌雄组均没有明显改变， 肾中金属硫蛋白表达轻微增高。另外，长期乙醇摄入后，大鼠脑、肝等 组织中锌水平明显增高，并存在性别差异。铜含量在小脑和海马中有一 定的改变，钙没有明显变化。组织中金属硫蛋白与锌水平呈现明显一致 性。 体外原代培养的神经胶质细胞中加入乙醇后，细胞生存活性受到抑 制。加入0．05％、0．10％、0．20％乙醇后，细胞相对生存率分别下降了 35．3％、38．3％，43．4％(P0．05)。本试验中金属硫蛋白3个剂量组对乙 2 华中科技大学同济医学院 硕士研究生论文 醇的细胞生存毒性效应没有观察到明显影响，加入硒可明显抑制乙醇的 细胞生存毒性，l、2、3mg／1的硒组细胞相对生存率分别上升19．O％、 33．7％、31．6％(PO．05)。在细胞培养液中同时加入乙醇和金属硫蛋白 或硒，金属硫蛋白或硒均可抑制乙醇对谷胱甘肽过氧化物酶活性的影 响，但相同剂量的金属硫蛋白不能抑制过氧化产物丙二醛的生成，而硒 ＼ 、一一