镉所致肾毒性及化性损害机制的研究.pdfVIP

镉所致肾毒性及氧化性损害机制的研究 硕士研究生：杨光 指导教师：仲来福 教授 专业名称：劳动卫生与环境卫生学 摘 要 前言：镉作为重要的工业原料，随着工业生产的迅速发展，它对 环境污染臼益严重，而且它在环境中非常稳定，不易降解。镉不仅是 公知公认的肾脏毒物，镉还是被确认的致癌物。国际癌症研究机构 肾毒性的作用机制的研究有了很大发展，认为金属硫蛋白(MT)可对 体内镉的运输、储存及毒性起作用；还有人认为镉可通过干扰酶的活 性而引起肾脏功能的损害；但越来越多的研究表明，作为一种强脂质 过氧化物作用的诱导剂，镉所致的肾毒性主要与氧化应激有关[5J。N一 oxygen 氧化反应中有重要作用，具有干扰自由基生成，预防DNA的损伤，对 抗细胞凋亡等作用。本研究以肾小管细胞系及大鼠整体动物为试验系 损害机制，为防制镉危害提供实验依据。 方法：以猪肾小管细胞系LLC．PKl细胞作为体外试验系统。噻唑 试验检测引起的DNA损伤，荧光法测定氧自由基水平。同时，以NAC 为干预物，观察其对上述效应终点的影响。 象，按体重随机分为4组，每组6只。各组及其处理如下：(1)对照 ·1‘ 续三天后，于第四天称重，乙醚麻醉下眼眶内眦静脉采血后处死大鼠。 观测指标：体重变化，肾脏系数，血清尿素氮(BUN)，肾皮质脂质过 氧化产物丙二醛(MDA)含量测定，肾组织形态学观察，并采用免疫 组化的方法检测肾组织中8一羟基脱氧鸟苷f8-OhdG)的表达情况。 最大的毒性作用，半数抑制浓度(IC50)为7．79±0．6 mg／L；lmM的 NAC干预后，IC50为28±5．56 mg／L，表明细胞毒性明显减小。CdCl， 作用后，细胞内氧自由基水平明显增加，且随CdCl：浓度的增加而增加； lmM的NAC干预后，细胞内氧自由基水平明显降低。经单细胞凝胶 u 电泳(SCGE)试验显示，CdCl2剂量在3 g／ml以上时，可致DNA链 所减轻。 性。表现为体重降低，BUN水平升高，‘肾脏系数升高，肾组织匀浆 MDA水平升高，与对照组比较，其差异具有统计学意义(PIO．05)， 组织形态学观察可见肾毒性急性肾小管损害表现。免疫组化结果显示 各实验组SD大鼠’肾组织中可检出氧化损伤标志物8-OHdG，其加合物 PALt-％ 与对照组间有非常显著性差异(p=O．叭)。 结论：CdCl2对LLC．PKt细胞具有细胞毒性作用，可诱发细胞内 的细胞毒性，并可降低细胞内氧自由基产生，还可预防DNA链断裂。 CDCl23天后，大 mg／kg mg／kg、5 一次给sD大鼠ip1．25mg／kg、2。5 鼠体重减轻，肾脏系数增加，血清BUN和肾皮质MDA的含量增高。 用免疫组化的方法可检测出染毒3天后，SD大鼠肾组织中8-OhdG的 表达为阳性。 以上结果提示，镉可导致ROS大量生成，这些ROS进一步促进 脂质过氧化反应；同时镉可造成DNA损伤，包括DNA链断裂及DNA 加合物的生成。NAC在一定程度上可以防护CdCl2的肾毒性，其机理 可能是作为体内活性氧系列物质的清除剂和还原性谷胱甘肽巯基的供 给体有关。 关键词：氯化镉 N．乙酰半胱氨酸 单细胞凝胶电泳8-OHdG Cadmium—inducedandMechanisms Nephrotoxicity ofOxidative