物质的提取和鉴定资料.doc

物质的提取 质粒DNA的提取 实验原理：质粒是存在于染色体外、能独立复制的双链闭合的环状DNA分子，以超螺旋的形式存在。在高pH值得NaOH和SDS溶液中，细菌细胞壁破裂，蛋白质和DNA发生变性。当加入中和溶液后，变性的染色体DNA与蛋白质缠绕形成大型复合体，被SDS包盖，当K 取代Na 时，这些复合体会沉淀下来；而质粒DNA双链能够迅速复性，呈溶解状态，留在上清液中。在上清液中加入乙醇，通过离心就可使质粒DNA沉淀下来。 实验步骤 1.取1.5ml菌液，室温下，12 000rpm，离心30秒。 2.弃上清，留沉淀，加入150μl冰预冷的溶液I（已加入RNase A），剧烈震荡，重悬沉淀。 3.加入150μl新配置的溶液II，快速颠倒混匀5次（注意：切勿震荡！），置于冰上。 4.加入200μl冰预冷的溶液III，反复颠倒数次混匀，冰浴5分钟。室温下，12 000rpm，离心5分钟。 5.取上清，转移到另一EP试管中，加等体积酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），颠倒混匀有机相和水相，室温下，12 000rpm，离心5分钟。 6.将上清转移到另一EP试管中，加等体积氯仿：异戊醇（24:1），颠倒混匀，室温下，12 000rpm，离心2分钟。 7.将上清转移到另一EP试管中，加两倍体积冰预冷的无水乙醇，颠倒数次混匀，冰浴10~15分钟后，室温下，12 000rpm，离心15