噬菌体聚糖酶在细菌生物被膜降解中应用的研究.pdfVIP

噬菌体聚糖酶在细菌生物被膜降解中的应用研究 噬菌体聚糖酶在细菌生物被膜降解中的应用研究 }两 姜 细菌生物被膜(biofilm，BF)的控制是食品工业的一大难题，它为被膜菌在 不良环境下的存活和生长提供了一种保护性结构，使其更容易引发食品腐败、设 备腐蚀和食源性疾病等危害。普通的消毒杀菌措施很难实现对成熟生物被膜细菌 的彻底清除，甚至导致细菌的抗药性造成更严重的后果。生物被膜的主要组成成 为降解生物被膜提供了一种新型安全高效的方法。本文以克雷伯氏菌血清型K13 为出发菌株，侵染K13的噬菌体P13及其聚糖酶为工具，研究了噬菌体及其酶 对生物被膜的降解作用。 生物被膜是细菌在一定条件下接触各种材质表面时的一种生长形式，菌体细 胞之间以胞外物质相互连结在一起形成空间网状具有一定密度的结构，这种结构 帮助细菌抵制各种不良环境而使其更好的生存、生长和繁殖。细菌胞外多糖是胞 外物质的主要成分，和无机盐离子、菌体、水等共同构成生物被膜。由添加KH2P04 和葡萄糖的营养肉汤培养基培养构建了生长于玻璃片上的生物被膜，定性染色法 及定量平板擦拭计数法表明克雷伯氏菌K13在培养一天时形成成熟的生物被膜。 噬菌体聚糖酶能够高效降解细菌胞外多糖并具有良好的热稳定性。该酶在噬 菌体侵染细菌并结合至宿主细胞表面的多糖物质时被释放出来，随之多糖物质被 酶解，进而噬菌体能够到达细菌表面受体裂解细菌。噬菌体聚糖酶经过1：2添加 比的丙酮沉淀后可达到最大限度的浓缩，从而达到较高的酶活，同时消除了大部 完全灭活，而这种热处理方式仍能保证该酶较高的酶活。 噬菌体聚糖酶对生物被膜具有显著降解作用，平板擦拭计数法显示酶处理4 h对生物被膜细菌数量的影响最为显著，80％的细菌被清除。含有噬菌体聚糖酶 的噬菌体裂解液对生物被膜也表现出较强的降解作用，在处理4h时可达到88％ 的被膜菌清除率。噬菌体聚糖酶预处理还可有效提高消毒N--氧化氯对生物被膜 electron 细菌的清除率。实验通过扫描电镜(scanning 处理不同时间的生物被膜中被膜菌及胞外多糖的结构变化、单位面积生物被膜细 菌群落数量的变化，观察结果表明，噬菌体聚糖酶能够有效减少处于连结状态的 噬菌体聚糖酶在细菌生物被膜降解中的应用研究 细菌和生物被膜中的胞外物质，当酶作用6h时，单位面积视野内仅剩下少量的 被膜菌，被膜菌之间的连结物质几乎全部被清除。研究表明K13噬菌体聚糖酶 对生物被膜具有高效的降解性能，有可能开发成为一种去除生物被膜的重要工 具。 利用噬菌体及其聚糖酶降解生物被膜的研究仍很少，它们作为一种特殊的新 型工具，结合定量平板擦拭计数法、扫描电镜以及其他染色技术，可以开发为研 究细菌生物被膜的重要技术。 关键词：噬菌体；生物被膜；聚糖酶；胞外多糖；克雷伯氏菌K13 噬菌体聚糖酶在细菌生物被膜降解中的应用研究 of onthe Applicationbacteriophageenzyme ofbacterialbiofilm degradation Abstract Theeliminationofbacterialbiofilm(BF)which the providesmicroorganisms witha structureto and protected survive thehostileenvironmentsin developagainst food a environmentis difficult