温和灸对小鼠细感染炎症的影响及其自噬机制研究.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………………．．I Abstract．．…．…．……．．…．……．．…………．…．………．．……．．．．…．…．………．．……．…．…．…．．．V 缩略词表……………………………………………………………………XII 前 言…………………………………………………………………………………………………．1 丹U 百…………………………………………………………………………………………………． 实验一温和灸对小鼠感染金黄色葡萄球菌的保护作用…………………．3 实验二温和灸对小鼠巨噬细胞杀菌作用与炎症因子表达的影响………13 实验三温和灸对小鼠巨噬细胞自噬通路的影响…………………………29 讨论与展望…………………………………………………………………．．41 参考文献……………………………………………………………………．．46 文献综述……………………………………………………………………．．53 文献综述……………………………………………………………………．．70 发表论文……………………………………………………………………．．84 致 谢………………………………………………………………………．．85 中文摘要 目的 双重功能的高度可塑性分化细胞，驻留于几乎所有的器官组织中。在胞外 微环境、内分泌、异源物质和衰老等条件刺激下，巨噬细胞能可逆性地分 化为炎症杀伤(M1)和抗炎修复(M2)两种类型。正常的巨噬细胞功能 是宿主防御、组织重建、免疫调节的中坚力量，失控的炎症反应是感染引 起组织损伤和死亡的主要因素，而抗炎过度引起的免疫抑制则是各种慢性 感染、代谢失调、癌症、自身免疫、衰老相关疾病的关键步骤。中医针灸 具有双向良性调节作用而广泛应用于各种疾病的预防、治疗和防衰保健 中，因此研究针灸对巨噬细胞的作用和机制对于了‘解针灸机理、提高针灸 临床疗效和对现代疾病谱的适用具有重要意义。我们通过对比大量古代文 献和现代研究发现，针灸很大一部分治疗作用与机体多系统、多中心、多 层次的炎症与抗炎、疼痛与镇痛有关，但温和灸的抗炎作用明显不在此列。 本课题以温和灸对金黄色葡萄球菌急性感染的治疗作用为切入点，围绕温 和灸对巨噬细胞的吞噬、杀菌功能以及多种促炎、抗炎细胞因子表达的影 响，探讨温和灸对于细菌感染和炎症的整体调节作用及机制，及更深层次 的细胞自噬通路机制，为针灸的临床应用提供实验依据。 方法 1．温和灸对金黄色葡萄球菌致死性感染的保护作用：SPF级昆明小 鼠雄性40只，体重18～22克，随机分为四组：A、空白对照组；B、模型 组；C、艾灸15min组；D、艾灸30min组，每组1O只。除空白对照组外， 其余30只腹腔注射6％淀粉肉汤2天后再腹腔注射金黄色葡萄球菌作为感 染模型。感染后模型组不做处理，C、D两组分别于感染后1小时艾灸小 生存力曲线。小鼠死亡后立即取腹腔液梯度稀释后用琼脂平板计数菌落 数，定量观察细菌感染程度。解剖所有小鼠称重检测反映炎症程度的胸腺 指数、脾指数。 2．温和灸对巨噬细胞杀菌活性和炎症细胞因子表达的影响：击感染后 即刻艾灸对巨噬细胞杀菌活性的影响。SPF级昆明小鼠雄性24只随机分 为三组：模型组；内对照组；即刻艾灸组。所有小鼠腹腔注射6％淀粉肉 Oh处死，内对照组感染后2h处死，即刻艾灸组感染后立即艾灸关元穴O．5h 并于2h处死。各组取腹腔液梯度稀释后用琼脂平板计数菌落数。a感染 吞噬后艾灸对巨噬细胞杀菌活性的影响。SPF级昆明小鼠雄性32只随机 分为四组：A、模型组；B、内对照组；C、艾灸O．5h组；D、艾灸1h组。 所有小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤2天后再腹腔注射大肠杆菌(MOI=20) 作为感染模型，模型组感染后Oh处死，内对照组感染后4h处死，C、D 两组感染1h后分别艾灸关元穴O．5h和1h并于4h处死。各组取腹腔液梯 度稀释后用琼脂平板计数菌落数。a感染吞噬后艾灸对炎症细胞因子表达 的影响。SPF级昆明小鼠雄性l6只，分组和处理同a，各组于感染后6h 炎症相关因子和炎症体蛋白caspase．1的表达水平。 3．温和灸对巨噬细胞自噬和自噬信号通路的影响：SPF级昆明小鼠雄 性40只随机分为四组：A、空白对照组；B、模型组；C、艾灸O．5h组； D、艾灸1h组。除空白对照组外，其余30只艾灸实验前2天腹腔注射6％ 淀粉肉汤作为巨噬细胞活化模型，2天后对C、D两组分别艾灸关元穴O