柴苓汤对慢性环素a肾病大鼠肾脏细胞增殖的影响.pdf

中文摘要 柴苓汤对慢性环孢素A肾病大鼠肾脏细胞增殖的影响 摘 要 目的：探讨细胞增殖在环孢素A(CsA)慢性肾损伤中的作用及中药复 方制剂柴苓汤对其的影响，为临床防治CsA肾毒性提供实验依据。 方法： 第一部分：柴苓汤对慢性环孢素A肾病大鼠肾功能及肾组织病理形 态学的影响 l动物分组、模型复制及药物治疗 经口灌服28天的方法，建立慢性CsA肾病大鼠模型。对照组每日灌胃给 与等容量橄榄油。造模的同时，两治疗组分别给予柴苓汤39／(kg·d)和缬 沙坦10mg／(kg·d)治疗，模型组和对照组则每日给予等容量生理盐水。 2指标检测 2．1体重及尿液检测每周末将所有大鼠移入代谢笼中，分别测量每 只大鼠体重、24小时尿量及尿肌酐。 2．2肾脏病理形态学检测切取大鼠左侧肾脏组织，4％多聚甲醛固 病理形态改变，并参照Katafuchi评分标准从炎性细胞浸润、间质纤维化、 肾小管萎缩三方面对肾小管间质损伤程度进行分析。 2．3肾功能检测实验第29天，所有大鼠被处死，取血以检测大鼠血 尿素氮(BUN)及血清肌酐(SCr)，并计算出肌酐清除率(CCr)。 3统计分析 数据资料以均数4-标准差(i士s)表示，使用SPSS16．0统计软件进行 统计，组间比较采用单因素方差分析。显著性差异水平以O．05和O．Ol为 标准。 第二部分：柴苓汤对慢性环孢素A肾病大鼠肾脏增殖细胞核抗原表 达的影响 l动物分组、模型复制、药物治疗及统计分析方法同第一部分。 中文摘要 2指标检测实验第29天，取大鼠部分肾脏组织，分别采用免疫组 达。 2．1免疫组化：采用SABC法，以光镜下肾脏组织出现棕黄色颗粒为 阳性表达。 2．2Western 并定量，依次进行电泳，转膜，免疫反应及显色。最后用富士LAS．4000 LIMINESCENT图像分析仪拍照。 2．3RT-PCR：根据Trizol RNA抽提试剂盒要求，切取100mg液氮保 存的肾组织，提取肾皮质总RNA，并反转录合成eDNA进行PCR反应。 凝胶图像分析系统进行分析。 2．4流式细胞术：取70％酒精固定的肾组织，制作肾间质、肾小管单 细胞悬液后，离心沉淀2分钟。取O．1ml单细胞悬液(细胞密度为1×106 个／mL)，加入碘化丙啶，40C冰箱避光染色30min，以500目铜网过滤。 采用美国Beckton l (Go／G1+S+G2M)x00％计算出增殖指数(PI)。 第三部分：柴苓汤对慢性环孢素A肾病大鼠肾脏结缔组织生长因子 表达的影响 1动物分组、模型复制、药物治疗及统计分析方法同第一部分。 2指标检测 实验第29天，取大鼠部分肾脏组织，分别采用免疫组 部分。 第四部分：柴苓汤对慢性环孢素A肾病大鼠肾脏纤维连接蛋白表达 的影响 1动物分组、模型复制、药物治疗及统计分析方法同第一部分。 2指标检测实验第29天，取大鼠部分肾脏组织，分别采用免疫组 分。 结果： 中文摘要 第一部分：柴苓汤对慢性环孢素A肾病大鼠肾功能及肾组织病理形 态学的影响 l体重及尿量检测结果 实验第一、二周，所有大鼠体重均有所增加，但同时段各组间比较无 明显差异(尸O．05)。随着实验时间的延长，模型组大鼠体重增长减缓， 至第四周末，模型组体重较前一周反而下降，且与同时段两治疗组相比有 差异(尸O．05)。然而至实验第4周末，模型组尿量较其余三组显著减少 (尸0．05)。 2病理形态学检测结果 HE染色结果：对照组未见明显异常；模型组肾间质大量炎性细胞浸 润，同时可见肾小管上皮细胞坏死、脱落；柴苓汤组及缬沙坦组肾脏损伤 程度明显轻于模型组。Masson染色结果：对照组肾间质可见少量胶原成 分。模型组肾间质胶原成分大量沉积，并呈条带状分布；柴苓汤及缬沙坦 组肾间质胶原成分较模型组明显减少。半定量分析结果表明，模型组肾小 管间质损伤各项参数积分值均明显高于对照组(尸O．01)。与模型组相比，