DNA重组技术的基本工具高.ppt

胰岛素是治疗糖尿病的特效药,长期以来只能从猪、牛等动物的胰腺中提取，产量低成本高。 而微生物生长迅速，容易控制。于是科学家设想，若能将人的胰岛素基因导入微生物体内，并得以表达，就不仅能解决产量问题，还能大大降低生产成本，使药品价格大幅下降。 本节知识内容 限制性内切酶作用过程 课本知识回顾 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加以 ， 然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 作为载体的条件： 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ── “分子缝合针” ── “分子运输车”── 限制（性核酸内切）酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 原核生物中分离纯化出来 特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 粘性末端 平末端 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： 两类 连接黏性末端 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 连接黏性末端和平末端 质粒 λ噬菌体衍生物 动植物病毒 天然质粒 人工改造 的 能自我复制；有切割位点； 有遗传标记基因；对受体细胞无害、易分离 基础上进行过 * * 设想一 能否培养出具有抗虫 性状的抗虫棉呢？ 设想二 能否让微生物产生出人的 胰岛素等珍贵药物？ 这些定向改造基因 的设想能实现吗？ 经过多年的努力，科学家终于在20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术 ——基因工程 基因工程的概念 基因工程：指按照人们的愿望,进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术或基因拼接技术。 实质 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 获得人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程的概念 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 抗虫棉的培育有哪些关键步骤？ 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 普通棉花(无抗虫特性) 棉花细胞(含抗虫基因) 与运载体DNA拼接，导入 棉花植株(有抗虫特性) 表达 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ DNA 重组技术的基本工具 §1 DNA重组技术的基本工具 专题一 基因工程 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是原核生物 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 脱氧核苷酸的结构 G 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ A 3’,5’-磷酸二酯键 3’端 5’端 3’端 5’端 磷酸二酯键 * 仔细观察各限制酶 识别的特定序列有何特点？ 限制酶的识别序列 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列 中轴线 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 EcoRI限制酶的作用 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被