DDIGE(荧光差异双向电泳).ppt

1. 2-DE 1. 2-DE 1. 2-DE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 2. 2-D DIGE 3. experiment 3. experiment 3. experiment 3. experiment 3. experiment 3. experiment 3. experiment 3. experiment 3. experiment 3. experiment 4. video 5.question 1. 用三色荧光染料标记样品是否会改变蛋白质的分子质量和等电点。 答：不会。这三种荧光染料是电荷和分子量匹配的，并且都是带一价正电荷，标记的是蛋白质赖氨酸的ε-氨基。由于ε-氨基上带有一价正电荷，当染料与蛋白质发生反应时就可以发生电荷取代，所以不会改变各蛋白质的等电点。虽然被标记蛋白质的分子质量有所改变，但样品中所有蛋白质的相对分子质量都等量增加了，所以依旧不会影响蛋白质的电泳结果 2、在第14张PPT中，很明显可以看出样品4的量要远远大于样品2，但为什么又说它们的量是一样的呢？ 答：因为在胶A中样品1与2的量相对于内标几乎是没有变化的，我们可以粗略的认为它们三者均一样。在胶B中我们可以得出样品4与内标一样，而样品3相对于内标有所减少。由于胶A与胶B的内标又相同的，所以样品4与样品2的量也是一样的。 1 2 1 3 4 5 6 2-D DIGE video 杨 华 丽 November 12th, 2015 2-D DIGE Contents 2-DE 1 2-D DIGE 2 Experiment 3 2-D DIGE video 4 荧光差异双向电泳技术（two dimension difference gel electrophoresis, 2D-DIGE） 2D-DIGE技术是一种新出现的荧光标记的定量蛋白质组学技术，它比经典的2-DE具有更高的动力学范围和灵敏性，是2-DE技术的成熟与完善。它通过三色荧光染料分别对内标和生物样本进行标记，能够在一张2D胶上对两个样本的多种蛋白质进行分离，并分别单独成像，应用DeCyder 2D软件分析图像，得到蛋白表达量的丰度变化，根据数据分析结果准确地发现差异蛋白。常规可检测到小于10%的蛋白表达差异而同时统计学可信度达到95%。 Virtual elimination of gel:gel variation is induced biological change with statistical accuracy capable of revealing differences in abundance of less than 10% between samples. 每个标记蛋白只携带一个染料标记，呈现一个蛋白质点