- 1、本文档共5页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
现代细胞生物学实验技术
细菌原生质体融合在育种中的应用
摘要:原生质体融合是细胞融合技术,也是遗传育种有效的方法之一。文中综述了原生质体融合的基本流程及影响细胞原生质体融合的因素和原生质体融合技术在育种中应用的研究进展。
关键字:原生质体, 细胞融合,遗传育种。
细菌原生质体融合(protoplast fusion)是通过人工方法将不同种的细胞通过无性繁殖方式融合成为一个核或者多核的杂合细胞的过程,进而获的双亲优良遗传形状,打破了微生物的种界界限,实现远缘菌株的基因重组,可使遗传物质传递更为完整。获得更多基因重组的机会。还可以与其他育种方法相结合,如把常规诱变和原生质诱变所获得的优良性状,组合到一个菌株中。原生质体融合技术起源于20世纪60年代。1960年法国的karski研究小组在两种不同类型的动物细胞混合培养中发现了直发融合现象。1974年匈牙利的Ferenczy L等[1]采用离心力诱导的方法,报道了白地霉营养缺陷型突变株的原生质体融合,从而使原生质体融合技术成为微生物育种的一项新技术,并从微生物种内融合扩展到界间的融合。原生质体融合技术已在农业、医药、环保等领域取得了开创性的研究成果,而且应用领域在不断扩大[2]
1.细菌原生质体融合技术
微生物原生质体融合技术的整个过程包括:原生质体的制备,原生质再生,融合,融合子的检出,遗传特性分析和测定。
1.1细菌原生质体的制备和再生
在原生质体的制备过程中,需要;考虑的是如何去除去除细胞壁,目前用于去壁的方法主要有机械法、非机械法(非酶法和酶法),而酶法是目前应用比较广泛的方法。其中,菌种的类型影响酶种类的选择,在放线菌和细菌中,主要采用溶菌酶,酵母菌和霉菌一般用蜗牛酶、消解酶或纤维素酶等。影响原生质体制备和再生的因素中,菌龄是一个因素,为了使细胞易于原生质体化,一般选择对数生长期或生长中期的菌体,也有的采用生长后期的菌,酶浓度以及作用时间也会影响原生质体的制备和再生率,一般来说酶的浓度越高,作用时间越长、原生质体的制备率就越高,但酶解时间过长又会影响再生率。对于不同的菌体,优化其最适酶溶度和作用时间非常必要。
1.2原生质体的融合
在自然条件下,原生质体发生融合的频率非常低,因此在实际育种过程中要采用一定的方法进行人为诱导融合。在微生物融合的过程中,常用诱导方法可分为:物理法(包括电融合和激光诱导融合法)和化学法(PEG结合高Ca2+、pH诱导法)。
在用PEG法诱导原生质体融合时,很多因素影响融合频率。PEG的浓度、PEG的聚合度、离子种类和融合剂pH、温度等。一般来说,PEG浓度为30-50%,相对分子质量在1000-6000的PEG都是有效的。在融合过程中,适量的Ca2+,Mg2+有助于融合,而K+,Na+则会使融合率降低。PEG加入,融合时间较长有利于提高融合率,但PEG有毒害作用,因此要筛选合适的PEG处理时间,通常PEG处理时间控制在1-10min。
电融合法:1978 年 ZIMMERMANN U 等[3]报道了电融合技术,在短时间强电场作用下,细胞膜发生可逆性电击穿,瞬时失去高电阻和低通透特性,数分钟后恢复原状,当可逆电击穿发生在 2 个相邻细胞接触区时,即可诱导它们的膜相互融合。余荔华等[4]对克氏固氮菌(Klebsiellaoxytoca)与枯草芽孢杆菌电融合技术进行了研究,获得了较高的融合频率。
激光诱导融合法:激光诱导融合是利用激光的光镊建立细胞间接触,利用激光微束对相邻细胞的接触区进行破坏,从而诱导2个相邻细胞融合。使用这项技术时,为促使细胞接触使用光俘虏法,也可结合使用低浓度的融合剂 PEG(5%)使细胞聚集[5]。朱振华等在融合枯草芽孢杆菌与黑曲霉原生质体时,用 He-Ne 激光诱导与 PEG 溶液一起促融效果较好,并且 He-Ne 激光照射4min 时融合频率最高为 9.16*10-5。
1.3融合子的筛选
根据筛选融合子的原理不同,可以分为:利用营养缺陷型标记筛选融合子,利用抗药性标记筛选融合子;利用灭活标记筛选融合子;利用荧光染色标记筛选融合子;利用某些特殊的生理特征作为标记筛选融合子;利用其它标记筛选融合子。
2、影响细菌原生质体融合的因素
用 PEG 作融合剂时,影响原生质体融合的因素很多,如 PEG 分子量与浓度、pH 值、离子种类与浓度、PEG 作用时间、温度、原生质体纯净与否、培养条件、酶解制备原生质体条件等对融合率都有一定的影响[6]。
细胞电融合由于融合频率高、融合迅速和毒害小的优点被广泛应用。融合率与电场强度、脉冲强度和脉冲个数有关。魏明宝等[7]将荧光蛋白标记的铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和少动鞘氨醇单胞菌(Sphingom-onas paucimobotis)原生质体进行电融合,随着电场强度、脉冲强度和脉冲个数的
您可能关注的文档
- 牛汇外汇交易基础知识的学习和综合分析.doc
- 牛津小学英语2B全册教案.doc
- 牛顿第二定律教案.doc
- 牦牛蹄筋硬蛋白比牦牛蹄筋效应更好.doc
- 物料有效期与复验管理程序2.doc
- 物流中心的设计与运作.doc
- 物流产业的市场集中度分析.doc
- 物流包装优秀案例分析.doc
- 物流技术与装备复习资料.doc
- 物理4.3《楞次定律》教案(新人教版选修3-2).doc
- 全球及中国碳酸氯甲基异丙酯(CAS-35180-01-9)行业市场发展分析及前景趋势与投资发展研究报告2024-2029版.docx
- 全球及中国中央轮胎充气系统行业市场发展分析及前景趋势与投资发展研究报告2024-2029版.docx
- 表演专业实践报告.doc
- 补偿柜使用手册.doc
- v管理建筑地产培训nc57.pdf
- 维修手册-订单号显微镜page 4 to 4.pdf
- 为空间不要在此处放置任何内容云计算roy campbell教授伊利诺伊厄-es网络服务.pdf
- 襄阳运用车间1季度乘务员素质达标考试的通知专项测试题附答案.doc
- 襄阳运用车间1季度乘务员素质达标考试的通知专项测试题有答案.doc
- 襄阳运用车间1季度乘务员素质达标考试的通知练习卷含答案.doc
文档评论(0)