心力康合剂含药清对大鼠心肌细胞肥大影响的研究.pdf

!!坠左鏖：垒趔垒药巫逋型塞鼠!坠题墅瞧目曼盍堂堕螋班塞 塑jl生匡堂瞳!Q壁!堡盟圭生迨童 中文摘要 目 的：肾索．血管紧张素．醛固酮系统过度活跃在多种心瓶管疾病的发生、发展 中发挥重要作用，缸管紧张素ll作为重要的生长促进因子，对多种组织、细胞的 生长具有促进作用，是刺激心肌肥厚的主要因素之一。本课题通过乳鼠心肌细胞 的原代培养，比较血管紧张素II刺激前后培养的心肌细胞周期分布改变情况，研 究血管紧张索II对心肌细胞生长的影响模式，同时分别从信号转导、核转录因子 表达、细胞内DNA、总蛋白合成、凋亡等方而研究心力康合剂含药血清对Angll 诱导的心肌细胞肥大的影响，以探讨该药物安全性及其作用机制。 方 法：通过对腹主动脉缩窄致心肌肥厚大鼠灌服心力康合剂，制备心力康含 药血清，薄层色谱法检测所取大鼠血清；应用胰蛋白酶和胶原酶联合分段消化法 分离心肌细胞。采取差速贴壁的方法对心肌细胞进行纯化，原代培养，建立细胞 模型；免疫细胞化学技术进行Q．Sarcomeric actin染色，鉴定心肌细胞纯度；MTT 法结合倒置相差显微镜分析心力康含药血清对心肌细胞的细胞毒作用；流式细胞 术检测心肌细胞周期分布、细胞内DNA合成及凋亡百分率；免疫细胞化学检测核 转录因子c-Jun蛋白、凋亡相关基因Bcl．2及Bax表达水平；放免法检测细胞内心 钠素合成、分泌情况。 结 果：(1)药物细胞毒性研究结果显示，使用心力康含药血清对正常心肌细 胞的活力无显著影响，在无外源性过度生长刺激的条件下，心力康含药血清不干 扰正常心肌细胞的细胞信号转导过程，对心肌细胞周期及凋亡率也无明显影响； (2)正常心肌细胞以血管紧张素II刺激的同时加入心力康含药血清共孵育组的心 肌细胞面积较单纯血管紧张索II刺激者为小，高剂量心力康含药血清共孵育组搏 动频率较单纯血管紧张素II刺激者慢：(3)与对照组相比，血管紧张素lI组心肌 细胞蛋白含量、表面积均显著增加，而心力康合剂含药血清对血管紧张素lI刺激 所致心肌细胞蛋白合成和表面积增加有显著抑制作用；(4)刺激24小时后，与对 38ng／ml，PO．01)，心力康含药血清干预后能明显降低血管紧张素II诱导心肌细胞 心钠素的合成；(5)与对照组相比，血管紧张素II刺激24小时后，细胞内Go／Gl、 GqM期DNA含量明显增加，心力康含药血清能明显抑制血管紧张素II诱导的 ：!坠也鏖：金趔盒煎鱼渣越态鲢!叠皿绝照月垦厶受煎的婴塞 塑jB生匡堂随!!!!堡鳢±生逢塞 2．8倍(，’O l；!j】显增加，以胞核增加最为显著，较对照组增JJ【l 05)，AngII与不同剂 量心力康含药血清共同孵育后，心肌细胞c-Jun蛋白表达水平与Ansll组相比显著 05)；(7)血管紧张索II刺激24小时后，心肌细胞Bcl一2表达水平明皿 降低(p0 05)，而Bax表达水平明显升高，较对照组增加1．15 降低，较对照组减少26％(，)O Bcl一2蛋白，商剂量心力康含药血清组与低剂量心力康含药血清组心肌细胞Bcl．2 25倍(，Ⅻ．05)。 分别较单纯AnglI刺激组增加l，29倍及1 结 论：使用血管紧张素u能显著促进乳鼠心肌细胞Go／Gl、G2／M期DNA合 成，增加细胞内总蛋白含量，单纯血管紧张索II刺激可以诱导心肌细胞发生肥大 反应，包括：细胞的体积增大，蛋白和DNA的合成增加；胚胎基因心钠素及原癌 基因c-Jun蛋白表达增加；在无外源性过度生长刺激存在的条件下，心力康合剂含 药觑清不影响正常心肌细胞的存活及生长，但是能有效降低心肌细胞对高浓度血 管紧张素Ⅱ刺激的反应性，这种对心肌细胞的保护作用可能与其具有的调节核转 录因子c．Jun蛋白的表达，抑制血管紧张素Ⅱ刺激所致心肌细胞心钠素的合成，改 善在病理刺激作用下Bcl-2／Bax蛋白表达的失衡状态，调节改变的心肌细胞凋亡相 关基因表达的作用有关。 关键词：@心力康合剂；心肌细胞；血管紧张素II：心肌细胞肥大；心肌重塑 ：尘盘鏖：：金裁宣药鱼遭型盍鲢!坠墅l塑8壁竖叁墅堕煎塑塑