转基因食品PCR定性检测要点.pptVIP

转基因食品PCR定性检测 ——转基因大豆及制品检测试验 相关系列标准： 应用范围： GB/T19495的本部分规定了转基因产品检测的核酸定性PCR方法。 本部分适用于种子、饲料、食品和环境样品中转基因成分的定性PCR检测。 检测原理： 一般原理： 定性分析包括对测试样品目标核算序列的筛选检测和特异性检测。 在设置合适的对照和在检测下限的情况下，定性检测结果要清楚判断样品是否为转基因产品。 本检测方法包括：目标序列的扩增和检测，扩增片段特异性的确证。 PCR扩增 目标序列的扩增是在反应缓冲液中，脱氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下进行的催化反应。在反应混合体系中不应存在DNA聚合酶的抑制剂。DNA扩增是一个循环的过程： —通过加热使双螺旋DNA变性为单链核酸： —在合适的温度下引物和目标序列发生退火； —在合适的温度下，结合在两条单链上的引物通过DNA聚合酶作用进行PCR延伸反应。 PCR产物检测和确证 可以通过凝胶电泳或其他方法检测PCR产物，必要是可以将PCR产物从凝胶中分离出来进行检测。 可以通过限制性内切酶酶切分析、杂交、DNA序列分析或者熔点曲线分析等方法对PCR产物进行确证。 采用实时荧光PCR方法检测时，扩增及检测同时进行。 检测步骤： 引物设计原则 PCR方法的选择： PCR反应条件及验证 结果判定： 植物基因组DNA提取方法： CTAB法 S