高级微生物学-重组与质粒课件.ppt

转座的遗传学效应 1. 插入突变失活； 2. 插入位置上出现新的基因； 3. 改变染色体结构； 4. 产生不稳定的突变等位基因； 5. 外显子改组； 6. 产生新的变异，有利于进化。 转座子是重要的遗传学工具 1. 基因转导的供体 2. 基因定位的标记 3. 筛选插入突变 4. 菌株构建 5. 基因克隆（转座子标签法） 导入大肠杆菌中进行结合转移 实例：井冈霉素产生菌中基于全基因组转座子 突变的高通量筛选方法 Tn5 转化具备的条件：感受态细胞和外源片段 * * Advanced Microbiology 上课时间 讲授题目 2013.11.11 原核微生物的重组和质粒 2013.11.18 微生物与食品 2013.11.25 微生物来源天然产物的生物合成 2013.12.02 微生物基因组学（上海交大白林泉教授） 2013.12.09 微生物的分离与分类鉴定 2013.12.16 专题汇报-被微生物成就了的吃货们 第九讲 原微核生物重组和质粒 Advanced Microbiology 主讲人：吴莹莹 wuyingying@xmu.edu.cn纲 要 细菌的重组：一般原理 细菌的质粒（应用：质粒载体） DNA转化 转导 细菌的结合 转座因子 原核微生物的遗传物质 染色体DNA 环状或线状双链DNA,，不与组蛋白结合； 单倍体； 决定主要性状。 2. 染色体外DNA 较小的共价闭合环状或线状双链DNA，如质粒； 一般多拷贝； 决定次要性状。 3. 基因一般连续排列，转录和翻译偶联 1. 细菌的重组：一般原理 基因重组（gene recombination）： 将两个不同性状个体的基因通过一定的方式转移到一起，并发生重新组合，产生新的遗传性状的过程，称为基因重组(gene recombination)或遗传重组。 不同的亲本DNA --- 交换 --- 重组 重组：遗传物质在分子水平上发生的交换； 杂交：在细胞水平上遗传物质的交换. 杂交必然包含着重组，但重组不仅限于杂交这一形式。 3. DNA转化 定义：受体细胞直接吸收供体细胞的DNA片段, 并与其染色体同源片段进行遗传物质交换，从而使受体细胞获得新的遗传性状的现象。 转化子（ transformant）：经转化后出现了供体性状的受体细胞称为转化子，即转化成功的菌落。 目前已知有二十多个种的G+和G-细菌具有自然转化的能力， 此过程可以发生在土壤和海洋环境中，可能是自然界遗传交换的重要方式。 转化的过程 感受态阶段 受体菌成为感受态 产生DNA受体位点（DNA结合蛋白）或局部原生质体化 条件： 特殊遗传类型 诱导因子：多肽类物质、SSCS、CaCl2、低温等 什么是感受态 感受态：是指受体细胞最易接受外源DNA片段并能实现转化的一种生理状态。一个细菌能否出现感受态是由其遗传性决定的，但受环境条件的影响也很大，因而表现差别很大。 感受态细胞（competent cell） ：具有摄取外源DNA能力的细胞。 自然感受态细胞 人工感受态细胞 自然感受态与人工感受态 人工感受态则是通过人为诱导的方法，使细胞具有 摄取DNA的能力，或人为地将DNA导入细胞内。 该过程与细菌自身的遗传控制无关 自然感受态的出现是细胞一定生长阶段的生理特性 （如肺炎链球菌的感受态出现在对数生长期） 受细菌自身的基因控制 转化因子 本质是离体的DNA片断或质粒DNA 。在不同的微生物中，转化因子的形式不同，dsDNA或ssDNA。其中最易与细胞表面结合的仍是dsDNA。 由于每个细胞表面能与转化因子相结合的位点有限（如肺炎链球菌约10个），因此，从外界加入无关的dsDNA就可竞争并干扰转化作用。 质粒DNA也是良好的转化因子，但它们通常并不能与核染色体组发生重组。 转化的频率通常为0.1％～1％，最高为20％。 II. DNA的结合与吸收 III. 转化DNA的整合 （RecA蛋白介导） 4. 转 导 转导：利用完全或部分缺陷噬菌体为媒介，把供体细胞的小片段DNA携带到受体细胞中，通过交换与整合，使后者获得前者部分遗传性状的现象。 由转导作用而获得供体细胞部分遗传性状的重组受体 细胞称为转导子 （tr