猪轮状病毒NSP4基因原核与真核表达载体构建及其表达的研究.pdfVIP

中文摘要 轮状病毒(rotavirusRV)是仔猪腹泻的重要原因，仔猪感染RV后迅速发生腹泻， 严重者常因脱水而死亡，给畜牧业造成严重的危害。RV血清型众多，血清的免疫交 叉保护性低，研究新型疫苗已经成为防制RV腹泻的研究热点。最近的研究显示轮状 病毒非结构蛋白NSP4与RV免疫相关，有可能成为轮状病毒疫苗研制的候选基因。本 研究则从猪轮状病毒NSP4着手对其特性进行初步研究，主要内容如下： 1．猪轮状病毒NSP4基因的克隆及鉴定 点的上、下游引物，并利用反转录聚合酶链式反应(RT．PCR)从病毒基因组中获得NSP4 过细胞培养的OSU株产生了很大的变异，它与报道的OSU株核苷酸序列同源性为81 ％，氨基酸同源性为83％，主要变异区段集中在C末端。该毒株更趋向于人轮状病毒， 它与人轮状病毒G10株核苷酸同源性为93％，与氨基酸序列同源性为95％。 2．NSP4基因片段原核表达载体的构建及其表达研究 实验设计了一对引物扩增了去掉前端疏水区的300bp左右的NSP4基因片段，并将 表达并纯化的NSP4c蛋白和免疫小鼠获得的阳性抗体构建了检测NSP4抗体的间接 ELISA方法。 3．NSP4基因真核表达载体的构建及其表达研究 细胞。该载体含有绿色荧光蛋白，因此直接用荧光倒置显微镜检测了NSP4基因的表 达情况。将昆明小鼠分成随机3组。第一、二组为空白对照和空载体对照，分别注射 第28d、35diSH性抗体水平增加，第42d抗体水平下降。 实验结果表明，重组真核表达载体pEGFP．N1．NSP4进行动物免疫时在细胞内得 到了表达，并且表达产物能诱导体液免疫反应产生抗体。该试验为NSP4结构和功能 的研究以及轮状病毒DNA疫苗的研究提供了材料和技术基础。 关键词：猪轮状病毒；NSP4；克隆；原核表达；真核表达 Constructionof and vectorsofPRVNSP4 prokaryoticeukaryoticexpression gene and ontheir study expression ZengYan(PreventiveVeterinaryMedcine) DirectedProf．WenXintianandassociate by prof．CaoSa@e the diarrheain causeof Abstract：Rotavirus(RV)are major youngpigs．Theyoungpigs are infectedRV induceddiarrhea and diedbecauseof itis quicklyalways dehydration，thus aseverehazardto the ofRVisnumerousandthe ofits graziery．Because crossing serotype isweak，to new vaccinehavebecomehot．Recent immunity investigategeneration researchsshowthatNSP4isassociatedwithRVimmune and aidin responsemay ofanefficacio